作者willie0208 (我不要現在就出征....)
看板Biotech
標題[求救] western blot
時間Mon Dec 22 17:14:18 2008
請問個位大大
小弟在做SDS page 轉漬到PVDF膜上時
我的power是用0.6A跑50mins
但是後來轉漬到膜上時
我的marker的band突然變得好淡
淡到都快看不到marker了
我marker的量是5ul
請大大幫忙解釋一下為什麼這樣?
是我那裡做錯還是我load的量不夠呢~
謝謝大大們的幫忙 感激感激
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.49.5
1F：推 hchs890843:我用350mA轉1.5~2hrs...600mA會不會太強了@.@ 12/22 17:25
2F：推 turtle24:該不會看到背面了吧? 12/22 19:32
3F：推 alaric:太淡, 可以多Laod, 不過要確定會不會影響到Western. 12/22 20:19
4F：推 kirby0415:你要看的protein大小多大?我通常看100kD以下的都是用 12/22 22:19
5F：→ kirby0415:300mA 1.5hrs,以上的話就2hrs!有可能是電流太強過頭了 12/22 22:20
6F：→ kirby0415:怕是沒transfer完全,可以把transfer完的gel去染 12/22 22:21
7F：→ kirby0415:coomassie!!我的marker都load 4ul,很ok喔!! 12/22 22:22
8F：推 liner76:染看看有沒有蛋白質吧,transfer buffer新配的嗎? 12/23 07:27
9F：→ willie0208:嗯~謝謝大大們的回答~我也覺得電流太強~但我學長說 12/23 09:12
10F：→ willie0208:PVDF膜不會因為電流太強而過頭讓marker變太淡 12/23 09:14
11F：→ willie0208:所以個位大大還有其他的想法嗎?? 12/23 09:14
12F：推 aceliang:...那你怎麼不問問學長？ 12/23 09:54
13F：推 chvkimo:marker突然變好淡? 意思是之前不會? 12/23 10:34
14F：推 zoom8080:transfer buffer太舊? 12/23 11:47
15F：推 usershzr:marker我試過3ul也是很清楚喔,而且過期的跟新鮮的都一樣 12/23 14:01
16F：→ usershzr:還是你PVDF膜泡的甲醇不過純,我有一次就是這樣>< 12/23 14:02
17F：→ willie0208:我今天用0.6A 35MIN MARKER明顯多了應該是真的電流過強 12/23 22:09
18F：→ willie0208:PVDF膜泡甲純的濃度也有差阿??這我就不知道了耶~ 12/23 22:09
19F：推 bluecsky:600mA真拼耶...你tank不會很熱嗎= = 12/24 21:38