作者willie0208 (我不要现在就出征....)
看板Biotech
标题[求救] western blot
时间Mon Dec 22 17:14:18 2008
请问个位大大
小弟在做SDS page 转渍到PVDF膜上时
我的power是用0.6A跑50mins
但是後来转渍到膜上时
我的marker的band突然变得好淡
淡到都快看不到marker了
我marker的量是5ul
请大大帮忙解释一下为什麽这样?
是我那里做错还是我load的量不够呢~
谢谢大大们的帮忙 感激感激
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.49.5
1F：推 hchs890843:我用350mA转1.5~2hrs...600mA会不会太强了@.@ 12/22 17:25
2F：推 turtle24:该不会看到背面了吧? 12/22 19:32
3F：推 alaric:太淡, 可以多Laod, 不过要确定会不会影响到Western. 12/22 20:19
4F：推 kirby0415:你要看的protein大小多大?我通常看100kD以下的都是用 12/22 22:19
5F：→ kirby0415:300mA 1.5hrs,以上的话就2hrs!有可能是电流太强过头了 12/22 22:20
6F：→ kirby0415:怕是没transfer完全,可以把transfer完的gel去染 12/22 22:21
7F：→ kirby0415:coomassie!!我的marker都load 4ul,很ok喔!! 12/22 22:22
8F：推 liner76:染看看有没有蛋白质吧,transfer buffer新配的吗? 12/23 07:27
9F：→ willie0208:嗯~谢谢大大们的回答~我也觉得电流太强~但我学长说 12/23 09:12
10F：→ willie0208:PVDF膜不会因为电流太强而过头让marker变太淡 12/23 09:14
11F：→ willie0208:所以个位大大还有其他的想法吗?? 12/23 09:14
12F：推 aceliang:...那你怎麽不问问学长？ 12/23 09:54
13F：推 chvkimo:marker突然变好淡? 意思是之前不会? 12/23 10:34
14F：推 zoom8080:transfer buffer太旧? 12/23 11:47
15F：推 usershzr:marker我试过3ul也是很清楚喔,而且过期的跟新鲜的都一样 12/23 14:01
16F：→ usershzr:还是你PVDF膜泡的甲醇不过纯,我有一次就是这样>< 12/23 14:02
17F：→ willie0208:我今天用0.6A 35MIN MARKER明显多了应该是真的电流过强 12/23 22:09
18F：→ willie0208:PVDF膜泡甲纯的浓度也有差阿??这我就不知道了耶~ 12/23 22:09
19F：推 bluecsky:600mA真拼耶...你tank不会很热吗= = 12/24 21:38