你可以試試看做一組control是REMOVE PMA以後放了至少半小時的cell lysate 跟沒有放半小時直接收下來的CELL LYSATE 看來不是本身BASAL LEVEL就已經比較高 因為: 1. REMOVE PMA很再加回去的MEDIUM(WITH SERUM)裡, 有很多growth factors(LIGAND)會induce signaling pathway 2. 細胞還滿sensitive的 如果拿的時候太大力動到它也可能會induce pathway (像erk 其他我不清楚不過我一律小心處理..) 3. 細胞剛剛換到新的medium 就算沒有serum也可能有些物質會induce pathway ps..以前有個專門做cell signaling的學長會要求我們換了medium 把死的跟飄的 細胞洗掉後 放至少半個小時才能 treat drug ※ 引述《jackness (馬的!!要拼老命了!)》之銘言： : 小弟最近在做signaling pathway的define : 我是用THP-1 cell 然後利用PMA使其分化成MACROPHAGE : 然後加藥看哪條PATHWAY會被TURN ON : 但是我發現0分鐘的 P-P38 OR P-JNK 都滿高的 (COMPARE TO 加藥的5~60分鐘) : 不知道該怎麼解決 : 有人有遇過類似的情形嗎 : 我是分化成MACROPHAGE後 : 先用PBS WASH 後在加藥(in medium+serum) : 因為要洗去PMA : 但是CONTROL的量卻很多 : 不像一般照理來講應該是沒有的 = = : 我也用過PBS WASH 後在加藥(in complete mediume) : 但還是沒辦法降低control 的磷酸量 : 希望聰明的大大可以幫幫忙 >"< : 謝謝.. --

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