你可以试试看做一组control是REMOVE PMA以後放了至少半小时的cell lysate 跟没有放半小时直接收下来的CELL LYSATE 看来不是本身BASAL LEVEL就已经比较高 因为: 1. REMOVE PMA很再加回去的MEDIUM(WITH SERUM)里, 有很多growth factors(LIGAND)会induce signaling pathway 2. 细胞还满sensitive的 如果拿的时候太大力动到它也可能会induce pathway (像erk 其他我不清楚不过我一律小心处理..) 3. 细胞刚刚换到新的medium 就算没有serum也可能有些物质会induce pathway ps..以前有个专门做cell signaling的学长会要求我们换了medium 把死的跟飘的 细胞洗掉後 放至少半个小时才能 treat drug ※ 引述《jackness (马的!!要拼老命了!)》之铭言： : 小弟最近在做signaling pathway的define : 我是用THP-1 cell 然後利用PMA使其分化成MACROPHAGE : 然後加药看哪条PATHWAY会被TURN ON : 但是我发现0分钟的 P-P38 OR P-JNK 都满高的 (COMPARE TO 加药的5~60分钟) : 不知道该怎麽解决 : 有人有遇过类似的情形吗 : 我是分化成MACROPHAGE後 : 先用PBS WASH 後在加药(in medium+serum) : 因为要洗去PMA : 但是CONTROL的量却很多 : 不像一般照理来讲应该是没有的 = = : 我也用过PBS WASH 後在加药(in complete mediume) : 但还是没办法降低control 的磷酸量 : 希望聪明的大大可以帮帮忙 >"< : 谢谢.. --

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