作者ribose (保濟丸)
看板Biotech
標題Re: [求救] cloning的問題
時間Mon Dec 8 13:14:01 2008
※ 引述《nidus (咕嘰)》之銘言：
: 實驗流程大略如下：
: ligation以及圖菌後
: 隔天長出colony
: 挑單一colony做cloning PCR
: 檢測是否目標基因有接進vector中
: 而我遇到的情況是cloning PCR檢測有看到目標基因被放大
: 而我將該菌珠培養O/N後 隔天抽plasmid
: 再做enzyme digestion 結果卻切不出那段基因出來
: 而且plasmid的位子好像在空的vector位子
這句的意思是... 看不太懂...
: 送定序出來的結果也很詭異
: ps我利用vector上的CMV30為primer 定序結果不到沒有我塞進去的gene
: 序列也跟vector不同
: 請問有人遇到跟我類似的狀況嗎？？
1. 抽 plasmid 的 colony 是和 coloning PCR 同一顆嗎
2. PCR 的產物一定是你預期的目標基因嗎？會不會是 vector 上的序列
3. enzyme digestion 結果切不出那段基因出來，請問切出來的結果是...
4. ligation 後其實可以跑膠看 ligation 有無成功，前提當然是 DNA 的濃度要在
跑膠系統敏感度可以看的到下限
以上是我想了解的問題，這樣比較好幫你解決
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◆ From: 61.230.81.127
1F：推 tsubasawolfy:它那句的意思是RE後的plasmid跟原本的vector跑膠位置 12/08 13:17
2F：→ tsubasawolfy:一樣 意即挑到的菌只有vector 12/08 13:18