作者ribose (保济丸)
看板Biotech
标题Re: [求救] cloning的问题
时间Mon Dec 8 13:14:01 2008
※ 引述《nidus (咕叽)》之铭言：
: 实验流程大略如下：
: ligation以及图菌後
: 隔天长出colony
: 挑单一colony做cloning PCR
: 检测是否目标基因有接进vector中
: 而我遇到的情况是cloning PCR检测有看到目标基因被放大
: 而我将该菌珠培养O/N後 隔天抽plasmid
: 再做enzyme digestion 结果却切不出那段基因出来
: 而且plasmid的位子好像在空的vector位子
这句的意思是... 看不太懂...
: 送定序出来的结果也很诡异
: ps我利用vector上的CMV30为primer 定序结果不到没有我塞进去的gene
: 序列也跟vector不同
: 请问有人遇到跟我类似的状况吗？？
1. 抽 plasmid 的 colony 是和 coloning PCR 同一颗吗
2. PCR 的产物一定是你预期的目标基因吗？会不会是 vector 上的序列
3. enzyme digestion 结果切不出那段基因出来，请问切出来的结果是...
4. ligation 後其实可以跑胶看 ligation 有无成功，前提当然是 DNA 的浓度要在
跑胶系统敏感度可以看的到下限
以上是我想了解的问题，这样比较好帮你解决
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.230.81.127
1F：推 tsubasawolfy:它那句的意思是RE後的plasmid跟原本的vector跑胶位置 12/08 13:17
2F：→ tsubasawolfy:一样 意即挑到的菌只有vector 12/08 13:18