作者nidus (咕嘰)
看板Biotech
標題[討論] nuclear extraction
時間Sun Nov 30 17:20:47 2008
cell membrane 與nuclear membrane成分差不多
都是層脂與一些protein
但是在抽nuclear extraction時
所使用的buffer A B C D
難道就不會破壞核膜嗎?
願聞其詳
謝謝^^
Buffer A: 10 mM HEPES (pH 7.9 at 4oC), 1.5 mM MgCl2 , 10 mM KCL and 0.5 mM
DTT
Buffer B: 0.3 HEPES (pH 7.9), 1.4 M KCL and 0.03 M MgCL2
Buffer C: 20 mM HEPES (pH 7.9), 25% (v/v) glycerol, 0.42 M NaCl, 1.5 mM
MgCl2, 0.2 mM EDTA, 0.5 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) and 0.5 mM
DTT
Buffer D: 20 mM HEPES (pH 7.9), 20% (v/v) glycerol, 0.1 M KCL, 0.2 mM EDTA,
0.5 mM PMSF, and 0.5 mM DTT. DTT and PMSF were added fresh to the buffers
just before use.
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.77.155
1F：推 hajimels:buffer A,B,C and D分別是什麼？ 願聞其詳 謝謝^^ 11/30 19:01
※ 編輯: nidus 來自: 125.225.146.170 (11/30 22:24)
2F：推 hajimels:其實我沒做過 只是想提醒原po給個solution的成分...^^"" 12/01 00:46
3F：→ hajimels:想說懂得板友可能比較好回答吧～ 12/01 00:46
4F：推 sharkcell:沒看到detergen的配方，所以對膜的傷害都不大 12/01 02:56
5F：推 bluecsky:A B C D好像就是緩衝液加鹽類配一些protease inhibitor.. 12/01 07:18
6F：→ bluecsky:這些應該傷害性都不大 這不是考量的主因吧XD 12/01 07:18
7F：推 bigcat24:低?度溶出細胞質 高?度溶出膜蛋白 有錯請更正 12/01 08:47
8F：推 stinky:buffer A: 低張溶液來打破細胞 12/01 10:46
9F：→ stinky:buffer B: 把細胞核的鹽濃度帶回 12/01 10:48
10F：→ stinky:buffer C: 用高鹽把細胞核蛋白溶出 12/01 10:49
11F：→ stinky:buffer D: 把溶出來的胞核蛋白帶回適當的溶液狀態 12/01 10:51
12F：推 stinky:buffer A的低張狀態並不會打破核膜 12/01 11:01
13F：→ stinky:我想在buffer C溶出核蛋白時核膜也還是完整的 12/01 11:02
14F：推 Ice9:buffer B 是用來取 cytosol 的吧。buffer 是 dialysis NE用。 12/14 04:40
15F：→ Ice9:sorry, 前句有誤。buffer D 是用來 dialysis 用的。 12/14 04:41
16F：→ Ice9:還有每一種處理後的離心速度有差，這對分離有重要作用。 12/14 04:42