作者nidus (咕叽)
看板Biotech
标题[讨论] nuclear extraction
时间Sun Nov 30 17:20:47 2008
cell membrane 与nuclear membrane成分差不多
都是层脂与一些protein
但是在抽nuclear extraction时
所使用的buffer A B C D
难道就不会破坏核膜吗?
愿闻其详
谢谢^^
Buffer A: 10 mM HEPES (pH 7.9 at 4oC), 1.5 mM MgCl2 , 10 mM KCL and 0.5 mM
DTT
Buffer B: 0.3 HEPES (pH 7.9), 1.4 M KCL and 0.03 M MgCL2
Buffer C: 20 mM HEPES (pH 7.9), 25% (v/v) glycerol, 0.42 M NaCl, 1.5 mM
MgCl2, 0.2 mM EDTA, 0.5 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) and 0.5 mM
DTT
Buffer D: 20 mM HEPES (pH 7.9), 20% (v/v) glycerol, 0.1 M KCL, 0.2 mM EDTA,
0.5 mM PMSF, and 0.5 mM DTT. DTT and PMSF were added fresh to the buffers
just before use.
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◆ From: 140.129.77.155
1F：推 hajimels:buffer A,B,C and D分别是什麽？ 愿闻其详 谢谢^^ 11/30 19:01
※ 编辑: nidus 来自: 125.225.146.170 (11/30 22:24)
2F：推 hajimels:其实我没做过 只是想提醒原po给个solution的成分...^^"" 12/01 00:46
3F：→ hajimels:想说懂得板友可能比较好回答吧～ 12/01 00:46
4F：推 sharkcell:没看到detergen的配方，所以对膜的伤害都不大 12/01 02:56
5F：推 bluecsky:A B C D好像就是缓冲液加盐类配一些protease inhibitor.. 12/01 07:18
6F：→ bluecsky:这些应该伤害性都不大 这不是考量的主因吧XD 12/01 07:18
7F：推 bigcat24:低?度溶出细胞质 高?度溶出膜蛋白 有错请更正 12/01 08:47
8F：推 stinky:buffer A: 低张溶液来打破细胞 12/01 10:46
9F：→ stinky:buffer B: 把细胞核的盐浓度带回 12/01 10:48
10F：→ stinky:buffer C: 用高盐把细胞核蛋白溶出 12/01 10:49
11F：→ stinky:buffer D: 把溶出来的胞核蛋白带回适当的溶液状态 12/01 10:51
12F：推 stinky:buffer A的低张状态并不会打破核膜 12/01 11:01
13F：→ stinky:我想在buffer C溶出核蛋白时核膜也还是完整的 12/01 11:02
14F：推 Ice9:buffer B 是用来取 cytosol 的吧。buffer 是 dialysis NE用。 12/14 04:40
15F：→ Ice9:sorry, 前句有误。buffer D 是用来 dialysis 用的。 12/14 04:41
16F：→ Ice9:还有每一种处理後的离心速度有差，这对分离有重要作用。 12/14 04:42