作者Locutus (電影狂)
看板Biotech
標題[求救] 做完ligation發現有contaminte到其他東西
時間Sun Nov 23 18:21:25 2008
我目前做construct碰到一個問題，我挑的幾個colony用restriction enzyme切都可以切下
和insert大小，我就把這幾個送去sequencing，我用的是T7 primer，從vector讀進去，可
是做sequecing的技術員說我送的sample有兩個template，的確sequence的圖有些是有兩個
peak，我就用這幾個clone做PCR，可以P出我要的大小，再把PCR product送去sequencing
，又都是我要的東西，因此我懷疑我ligation的時候有contaminte到其他東西，我又把這
幾個clone重新transform嘗試把contamination分離，我再送這些我認為去掉contaminate
的clone去sequencing，結果還是有兩個template，可見我還是沒把他們分開，我想問一下
有人有這樣的經驗嗎，我該怎麼把他們分開。
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 219.84.236.37
※ 編輯: Locutus 來自: 219.84.236.37 (11/23 18:28)
1F：推 blence:建議你可以換個primer,vector可能有2個T7,或2個類似的site 11/23 18:54
2F：→ Locutus:根據data sheet這個vector只有一個T7，不過我不知道有沒有 11/23 20:01
3F：→ Locutus:類似的site，我會換個primer，不過我比較傾向是污染 11/23 20:02
4F：推 micocat:plasmid 稀釋10倍或100倍再去transform呢 11/24 15:42
5F：→ micocat:有二個 template可能是e coli帶有二種plasmid 11/24 15:43
6F：→ micocat:稀釋plasmid之後 再用colony PCR check看看 11/24 15:44