作者Locutus (电影狂)
看板Biotech
标题[求救] 做完ligation发现有contaminte到其他东西
时间Sun Nov 23 18:21:25 2008
我目前做construct碰到一个问题，我挑的几个colony用restriction enzyme切都可以切下
和insert大小，我就把这几个送去sequencing，我用的是T7 primer，从vector读进去，可
是做sequecing的技术员说我送的sample有两个template，的确sequence的图有些是有两个
peak，我就用这几个clone做PCR，可以P出我要的大小，再把PCR product送去sequencing
，又都是我要的东西，因此我怀疑我ligation的时候有contaminte到其他东西，我又把这
几个clone重新transform尝试把contamination分离，我再送这些我认为去掉contaminate
的clone去sequencing，结果还是有两个template，可见我还是没把他们分开，我想问一下
有人有这样的经验吗，我该怎麽把他们分开。
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◆ From: 219.84.236.37
※ 编辑: Locutus 来自: 219.84.236.37 (11/23 18:28)
1F：推 blence:建议你可以换个primer,vector可能有2个T7,或2个类似的site 11/23 18:54
2F：→ Locutus:根据data sheet这个vector只有一个T7，不过我不知道有没有 11/23 20:01
3F：→ Locutus:类似的site，我会换个primer，不过我比较倾向是污染 11/23 20:02
4F：推 micocat:plasmid 稀释10倍或100倍再去transform呢 11/24 15:42
5F：→ micocat:有二个 template可能是e coli带有二种plasmid 11/24 15:43
6F：→ micocat:稀释plasmid之後 再用colony PCR check看看 11/24 15:44