※ 引述《ricky31 (榤)》之銘言： : 之前萃取蛋白是加入PBS刮下來的 : 可是老師覺得 : 用trypsin打下來會比較好 : 測出來的濃度 : 的確 : 比用加入PBS刮下來的濃度高太多 : 但是 : trypsin本身就是一種蛋白 : 這樣子的作法 : 不會影響細胞蛋白嗎? : 老師覺得不會 : 但是 : 因為跟先前用PBS刮下來測出的濃度差太多了 : (用PBS的作法,濃度大約在200~300ug/ml，用trypsin的作法,濃度在800~1400ug/ml) : 所以我還是很懷疑用trypsin萃蛋白的作法>"< : 有人可以幫我解答嗎? : 謝謝大家~ 使用trypsin可用來增加收取的細胞數，而不是用來萃取蛋白。 將細胞收下來之後，可低速離心去除含有trypsin的上清液， 再加入RIPA buffer將細胞lysis，高速離心取得含有蛋白的上清液去測定濃度。 (其實，我也不甚了解您的實驗，所以不確定上述方法是否適合您使用) 一般常用RIPA buffer來lysis cell進而萃取蛋白。 不曉得您為什麼會使用PBS來萃取? 您萃取出的蛋白質濃度看來有點稀，可能是因為萃取方法不太適當。 您考量的trypsin會影響蛋白濃度測定，理論上是會影響的， 要實際證明，直接把trypsin拿去測蛋白質濃度就可知道。 BTW，有很多工具書和網路資料可查到萃取蛋白的方法，不妨參考一下。 還有版上的菁華區也有很多寶藏~ --

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