作者gg258 (48)
看板Biotech
標題[討論] 可否先染CBG再做Western
時間Tue Nov 18 20:51:54 2008
通常傳統的做法是
跑一片cbg跑一片western
先不考慮為什麼要在同一片做cbg又做western
實際做起來的話
就是先將膠fix半小時
再用cbg染一小時~O/N，掃描起來後，用fix buffer(或水)退染
註：我是用cbg-250 colloidal system
最後拿去做wet transfer，blocking、染抗體…
我這樣假設性的做法ok嗎？
只是想問問看有沒人做過XD
然後fix buffer加下去是不是會影響 transfer 效率
不過不加的話染的過程中蛋白質會跑光？
或是 cbg 退染不完全會怎麼樣
…
不同的coomassie system 也沒關係
說說各位的經驗
OR
發揮各位的想像力唄？=w=)>
註二：transfer完直接用 Ponceau S 染也可以看蛋白質在不在啦
不過 sentivity 比較差，而且用數位相機也照不清楚
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◆ From: 203.73.6.116
1F：推 alaric:你做 cbg的目的? 如果只是為了看Trasnfer效率, 11/18 23:39
2F：→ alaric:那就把Trasfer過的gel, 再cbg就可. 11/18 23:39
3F：推 tsubasawolfy:通常大家會比較擔心被CBG塞滿的protein能不能被1Ab 11/19 07:28
4F：→ tsubasawolfy:辨識 應該說antibody認的motif是不是還能fit 11/19 07:29
5F：推 phyton:我們實驗室是一直用 PonceauS 不過量小就直接不管他照做XD 11/19 08:16
6F：→ gg258:有空來試試看CBG染+退染後的transfer效率好了XD再來如果anti 11/19 20:42
7F：→ gg258:body能work的話說不定可以成功=w=+，謝大家的意見嘍 11/19 20:43
8F：→ fliegen:你可以transfer後用 fast green 很便宜又好用 且不影響 11/23 01:39