作者gg258 (48)
看板Biotech
标题[讨论] 可否先染CBG再做Western
时间Tue Nov 18 20:51:54 2008
通常传统的做法是
跑一片cbg跑一片western
先不考虑为什麽要在同一片做cbg又做western
实际做起来的话
就是先将胶fix半小时
再用cbg染一小时~O/N，扫描起来後，用fix buffer(或水)退染
注：我是用cbg-250 colloidal system
最後拿去做wet transfer，blocking、染抗体…
我这样假设性的做法ok吗？
只是想问问看有没人做过XD
然後fix buffer加下去是不是会影响 transfer 效率
不过不加的话染的过程中蛋白质会跑光？
或是 cbg 退染不完全会怎麽样
…
不同的coomassie system 也没关系
说说各位的经验
OR
发挥各位的想像力呗？=w=)>
注二：transfer完直接用 Ponceau S 染也可以看蛋白质在不在啦
不过 sentivity 比较差，而且用数位相机也照不清楚
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.73.6.116
1F：推 alaric:你做 cbg的目的? 如果只是为了看Trasnfer效率, 11/18 23:39
2F：→ alaric:那就把Trasfer过的gel, 再cbg就可. 11/18 23:39
3F：推 tsubasawolfy:通常大家会比较担心被CBG塞满的protein能不能被1Ab 11/19 07:28
4F：→ tsubasawolfy:辨识 应该说antibody认的motif是不是还能fit 11/19 07:29
5F：推 phyton:我们实验室是一直用 PonceauS 不过量小就直接不管他照做XD 11/19 08:16
6F：→ gg258:有空来试试看CBG染+退染後的transfer效率好了XD再来如果anti 11/19 20:42
7F：→ gg258:body能work的话说不定可以成功=w=+，谢大家的意见喽 11/19 20:43
8F：→ fliegen:你可以transfer後用 fast green 很便宜又好用 且不影响 11/23 01:39