作者sweetE (sweetE)
看板Biotech
標題[求救]推薦 二抗conjugated的螢光分子 (IF用
時間Mon Nov 17 21:59:56 2008
請問 各位大大 是否可以推薦
做IF 所使用的"好用"二抗 (螢光強度 超強)
目前 我所使用的 是FITC
上confocal 根本看不到 訊號極極極弱
染抗體 之前的步驟 已抓過condition
3.7% formaldehyde (fixation)
5% Triton X-100 (permeabilization)
此抗體在別株細胞中 使用Triton X-100打洞 是ok的
所以 我想應該不用換 Detergent
一抗 已經用到 1:25
所以 我想換一種二抗試試
先前跟別家實驗室借用過Invitrogen Alexa Fluro 594 (紅光)，使用1:150
染起來 有比FITC 好一點
不過在新購二抗 之前 想先聽聽大家 是否 用過更好用的
感謝 不吝分享!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.231.1.2
1F：推 kirby0415:推alexa488 不太quench~PE蠻亮但很容易quench 11/17 23:39
2F：→ kirby0415:PECy5用顯微鏡看不太好,但跑FACS不錯,alexa不能跑facs 11/17 23:40
3F：→ kirby0415:但顯微鏡看很強!! 11/17 23:41
4F：→ kirby0415:其實我覺得最主要看你要看的東西是甚麼還有你的一抗特不 11/17 23:41
5F：→ kirby0415:特異... 11/17 23:41
6F：推 kirby0415:我們家除了alexa488之外 其它好像都是s.c.的吧... 11/17 23:44
7F：→ kirby0415:S.C.的二抗在我們家大概都是1:150~600不等 但alexa488 11/17 23:44
8F：→ kirby0415:用來看我們家要看的東西的時候只要1:2000 11/17 23:45
9F：→ kirby0415:但忘記是哪家的了 囧 11/17 23:45
10F：推 Asialin:Alexa488應該是invitrogen，冷泉港比較便宜 11/18 09:11
11F：→ yuchipeter:Alexa488 molecular probe 11/18 09:43
12F：→ sweetE:如果 Alexa 488跟FITC比呢? 11/18 10:55
13F：推 slowmove:你的問題看起來感覺一抗才是主因... 11/18 15:44
14F：→ slowmove:後面WASH一直都有T-100嗎? 11/18 15:45
15F：→ sweetE:我BLOCKING 跟 一抗裡都有5%Triton X-100 11/18 16:04
16F：推 sakuru:5%很強耶, 我們平常都做0.1~0.5% 11/18 17:12
17F：→ conective:0.3%(舉手) 11/18 17:33
18F：推 oplz:tx100 濃度太強, alexa 2'Ab 1:150 太高了..1:1000 差不多 11/19 01:32
19F：→ oplz:FITC 其實已經很夠了..除非你要照 Z-axis or timelapse 11/19 01:32
20F：→ oplz:讓你看見有沒有 signal 絕對沒有問題 11/19 01:33
21F：→ oplz:先確定你的 1'Ab 堪不堪用比較好 11/19 01:34
22F：推 tsubasawolfy:我覺得是T-100太多了干擾到1Ab binding - -a 11/19 07:32
23F：→ sweetE:sorry 我說錯了~是0.5% Triton X-100..... 11/19 12:01
24F：→ sweetE:我是照Z axis沒錯，所以在螢光顯微鏡上看還可以 上confocal 11/19 12:02
25F：→ sweetE:照 z axis PMT開到最大 才勉強能看 11/19 12:03
26F：推 kirby0415:我一二抗都是1%BSA,一抗前先goat IgG block 11/19 22:15
27F：推 gamer123:那有人推jackson的嗎?...FITC和RRX 11/20 01:12
28F：推 Nikio:推薦488！強 11/26 01:37