作者sweetE (sweetE)
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标题[求救]推荐 二抗conjugated的萤光分子 (IF用
时间Mon Nov 17 21:59:56 2008
请问 各位大大 是否可以推荐
做IF 所使用的"好用"二抗 (萤光强度 超强)
目前 我所使用的 是FITC
上confocal 根本看不到 讯号极极极弱
染抗体 之前的步骤 已抓过condition
3.7% formaldehyde (fixation)
5% Triton X-100 (permeabilization)
此抗体在别株细胞中 使用Triton X-100打洞 是ok的
所以 我想应该不用换 Detergent
一抗 已经用到 1:25
所以 我想换一种二抗试试
先前跟别家实验室借用过Invitrogen Alexa Fluro 594 (红光)，使用1:150
染起来 有比FITC 好一点
不过在新购二抗 之前 想先听听大家 是否 用过更好用的
感谢 不吝分享!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.231.1.2
1F：推 kirby0415:推alexa488 不太quench~PE蛮亮但很容易quench 11/17 23:39
2F：→ kirby0415:PECy5用显微镜看不太好,但跑FACS不错,alexa不能跑facs 11/17 23:40
3F：→ kirby0415:但显微镜看很强!! 11/17 23:41
4F：→ kirby0415:其实我觉得最主要看你要看的东西是甚麽还有你的一抗特不 11/17 23:41
5F：→ kirby0415:特异... 11/17 23:41
6F：推 kirby0415:我们家除了alexa488之外 其它好像都是s.c.的吧... 11/17 23:44
7F：→ kirby0415:S.C.的二抗在我们家大概都是1:150~600不等 但alexa488 11/17 23:44
8F：→ kirby0415:用来看我们家要看的东西的时候只要1:2000 11/17 23:45
9F：→ kirby0415:但忘记是哪家的了 囧 11/17 23:45
10F：推 Asialin:Alexa488应该是invitrogen，冷泉港比较便宜 11/18 09:11
11F：→ yuchipeter:Alexa488 molecular probe 11/18 09:43
12F：→ sweetE:如果 Alexa 488跟FITC比呢? 11/18 10:55
13F：推 slowmove:你的问题看起来感觉一抗才是主因... 11/18 15:44
14F：→ slowmove:後面WASH一直都有T-100吗? 11/18 15:45
15F：→ sweetE:我BLOCKING 跟 一抗里都有5%Triton X-100 11/18 16:04
16F：推 sakuru:5%很强耶, 我们平常都做0.1~0.5% 11/18 17:12
17F：→ conective:0.3%(举手) 11/18 17:33
18F：推 oplz:tx100 浓度太强, alexa 2'Ab 1:150 太高了..1:1000 差不多 11/19 01:32
19F：→ oplz:FITC 其实已经很够了..除非你要照 Z-axis or timelapse 11/19 01:32
20F：→ oplz:让你看见有没有 signal 绝对没有问题 11/19 01:33
21F：→ oplz:先确定你的 1'Ab 堪不堪用比较好 11/19 01:34
22F：推 tsubasawolfy:我觉得是T-100太多了干扰到1Ab binding - -a 11/19 07:32
23F：→ sweetE:sorry 我说错了~是0.5% Triton X-100..... 11/19 12:01
24F：→ sweetE:我是照Z axis没错，所以在萤光显微镜上看还可以 上confocal 11/19 12:02
25F：→ sweetE:照 z axis PMT开到最大 才勉强能看 11/19 12:03
26F：推 kirby0415:我一二抗都是1%BSA,一抗前先goat IgG block 11/19 22:15
27F：推 gamer123:那有人推jackson的吗?...FITC和RRX 11/20 01:12
28F：推 Nikio:推荐488！强 11/26 01:37