作者sicaa (西卡)
看板Biotech
標題[求救] 很詭異的PCR
時間Wed Nov 12 00:49:08 2008
我現在是想要用PCR把某plasmid上一的段Tag夾出來，再接construct
那段Tag的大小是247 bp
但我發現很詭異的是，使用ExTaq和GoTaq夾出來的band大小不一樣
（感覺GoTaq比較像我要的大小，而且band的亮度比較夠）
我試過使用一樣的PCR條件，或是延長ExTaq的elongation時間，或是load不同量的DNA
甚至和別間lab借ExTaq和ExTaq buffer，結果都是一樣，
ExTaq p出來的結果跑膠，只會看到一團霧霧的，比primer略大，比GoTaq P的結果略小
不知道大家有沒有遇過這種情況呢？
我想做recombinant protein，擔心GoTaq夾出來的東西不若ExTaq準確。
也考慮過直接從該plasmid切下我要的insert，但cut site和我後續使用的suttle vector
無法配合...orz
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◆ From: 203.118.237.127
1F：推 sGoat:雖然說247bp Taq出錯率不大,但是為了保險起見還是定個序吧 11/12 11:42
2F：→ sGoat:畢竟Taq再強也還是Taq,不是pfu... 11/12 11:43
3F：→ sGoat:另外要是跑出來的霧霧的看不出band的話,不是的機率很高 11/12 11:44