作者sicaa (西卡)
看板Biotech
标题[求救] 很诡异的PCR
时间Wed Nov 12 00:49:08 2008
我现在是想要用PCR把某plasmid上一的段Tag夹出来，再接construct
那段Tag的大小是247 bp
但我发现很诡异的是，使用ExTaq和GoTaq夹出来的band大小不一样
（感觉GoTaq比较像我要的大小，而且band的亮度比较够）
我试过使用一样的PCR条件，或是延长ExTaq的elongation时间，或是load不同量的DNA
甚至和别间lab借ExTaq和ExTaq buffer，结果都是一样，
ExTaq p出来的结果跑胶，只会看到一团雾雾的，比primer略大，比GoTaq P的结果略小
不知道大家有没有遇过这种情况呢？
我想做recombinant protein，担心GoTaq夹出来的东西不若ExTaq准确。
也考虑过直接从该plasmid切下我要的insert，但cut site和我後续使用的suttle vector
无法配合...orz
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◆ From: 203.118.237.127
1F：推 sGoat:虽然说247bp Taq出错率不大,但是为了保险起见还是定个序吧 11/12 11:42
2F：→ sGoat:毕竟Taq再强也还是Taq,不是pfu... 11/12 11:43
3F：→ sGoat:另外要是跑出来的雾雾的看不出band的话,不是的机率很高 11/12 11:44