作者EscaflowneXP (Justin)
看板Biotech
標題[閒聊] ligation 疑問
時間Sat Nov 8 18:40:34 2008
剛剛在逛 有關ligation的第三篇
作者切 EcoRI 和 XhoI 後再做ligation
結果就是有人建議用CIP
可是 明明兩邊切出來 都是cohesive end
為什摸還要用CIP
而且 他們的cutting site 也完全沒有互補
EcoRI
5' G
3' CTTAA
XhoI
5' TCGAG
3' C
___________________________________________________
還是說 作者其實是 切完兩刀後 用enzyme把它都補齊 做成blunt end
所以才要做CIP?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.125.66
1F：推 hchs890843:有時候多做一個CIP...東西就做出來了 11/08 18:57
2F：→ hchs890843:硬要去找那原因也是不錯...可是蠻耗力的 11/08 18:57
3F：→ hchs890843:以前是聽說長得很像的base可能會亂黏所以就自接起來 11/08 18:57
4F：推 bluecsky:那個 真的要連起來不一定要完全互補歐.. 11/08 19:21
5F：→ bluecsky:不管怎麼樣還是有可能自己接起來 當然都sticky end 11/08 19:21
6F：→ bluecsky:機率可能比較小 但也不是沒有.. 11/08 19:22
7F：→ bluecsky:基本上選兩個不同enzyme cutting site本來就很難一樣.. 11/08 19:22
8F：→ bluecsky:不用也可以 用也可以 取決於你XD..有時真的多一個cip就ok 11/08 19:23
9F：推 blence:酵素活性不一,就算努力切兩刀,還是會殘留不少只切一刀,這不 11/08 19:24
10F：→ blence:就互補了？ 而且這種單切的又比雙切有更高機率ligation 11/08 19:26
11F：推 mtdas:防兩個vector自黏 11/08 21:58
12F：推 yaliu:我為了避免自接，只能盡量讓自己的vector切乾淨XD 11/08 22:50
13F：→ yaliu:所以我都不做CIP的 11/08 22:50