作者EscaflowneXP (Justin)
看板Biotech
标题[闲聊] ligation 疑问
时间Sat Nov 8 18:40:34 2008
刚刚在逛 有关ligation的第三篇
作者切 EcoRI 和 XhoI 後再做ligation
结果就是有人建议用CIP
可是 明明两边切出来 都是cohesive end
为什摸还要用CIP
而且 他们的cutting site 也完全没有互补
EcoRI
5' G
3' CTTAA
XhoI
5' TCGAG
3' C
___________________________________________________
还是说 作者其实是 切完两刀後 用enzyme把它都补齐 做成blunt end
所以才要做CIP?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.125.66
1F：推 hchs890843:有时候多做一个CIP...东西就做出来了 11/08 18:57
2F：→ hchs890843:硬要去找那原因也是不错...可是蛮耗力的 11/08 18:57
3F：→ hchs890843:以前是听说长得很像的base可能会乱黏所以就自接起来 11/08 18:57
4F：推 bluecsky:那个 真的要连起来不一定要完全互补欧.. 11/08 19:21
5F：→ bluecsky:不管怎麽样还是有可能自己接起来 当然都sticky end 11/08 19:21
6F：→ bluecsky:机率可能比较小 但也不是没有.. 11/08 19:22
7F：→ bluecsky:基本上选两个不同enzyme cutting site本来就很难一样.. 11/08 19:22
8F：→ bluecsky:不用也可以 用也可以 取决於你XD..有时真的多一个cip就ok 11/08 19:23
9F：推 blence:酵素活性不一,就算努力切两刀,还是会残留不少只切一刀,这不 11/08 19:24
10F：→ blence:就互补了？ 而且这种单切的又比双切有更高机率ligation 11/08 19:26
11F：推 mtdas:防两个vector自黏 11/08 21:58
12F：推 yaliu:我为了避免自接，只能尽量让自己的vector切乾净XD 11/08 22:50
13F：→ yaliu:所以我都不做CIP的 11/08 22:50