作者charlielg (chi)
看板Biotech
標題[討論] 基因選殖問題?
時間Wed Nov 5 18:17:35 2008
我要表現一段大約3kb大小的cDNA序列,可是這一段序列量不足,需重新量化
,但是這一段cDNA並無放進plasmid,然而僅有5'端及3'端以及中間部份序列有
被放進plasmid中,這三段序列兩兩有重疊部分.我再想是否可先將這三段序列
量化出來,接著再利用pcr方式將此三段合成一段在以此當template來量化出我
要的全長cDNA序列.不知此方法可行嗎?
3kb
├────────────┤
5端部份序列
├─────┤
中間部分序列
├──────┤ 3端部份序列
├────────┤
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.121.155.210
1F：推 alaric:三段PCR產物, 可以接成一段. 只要最外側的primers. 11/05 18:56
2F：→ alaric:PCR產物最好純化過, 再進行下一個PCR反應. 11/05 18:57
3F：→ alaric:重疊的部份, 最好超過20bp以上, PCR比較容易成功. 11/05 18:58
4F：→ alaric:困難度一定有,要有失敗的心理準備. 接成一段,可以省時. 11/05 18:59
5F：→ alaric:也可以先試A+B or B+C 的PCR, 評估兩股PCR的成功率.. 11/05 19:01
6F：推 yaliu:如果有cDNA，應該可以直接將整段P出來吧...? 11/05 22:11