作者charlielg (chi)
看板Biotech
标题[讨论] 基因选殖问题?
时间Wed Nov 5 18:17:35 2008
我要表现一段大约3kb大小的cDNA序列,可是这一段序列量不足,需重新量化
,但是这一段cDNA并无放进plasmid,然而仅有5'端及3'端以及中间部份序列有
被放进plasmid中,这三段序列两两有重叠部分.我再想是否可先将这三段序列
量化出来,接着再利用pcr方式将此三段合成一段在以此当template来量化出我
要的全长cDNA序列.不知此方法可行吗?
3kb
├────────────┤
5端部份序列
├─────┤
中间部分序列
├──────┤ 3端部份序列
├────────┤
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.121.155.210
1F：推 alaric:三段PCR产物, 可以接成一段. 只要最外侧的primers. 11/05 18:56
2F：→ alaric:PCR产物最好纯化过, 再进行下一个PCR反应. 11/05 18:57
3F：→ alaric:重叠的部份, 最好超过20bp以上, PCR比较容易成功. 11/05 18:58
4F：→ alaric:困难度一定有,要有失败的心理准备. 接成一段,可以省时. 11/05 18:59
5F：→ alaric:也可以先试A+B or B+C 的PCR, 评估两股PCR的成功率.. 11/05 19:01
6F：推 yaliu:如果有cDNA，应该可以直接将整段P出来吧...? 11/05 22:11