作者suglaz (小微)
看板Biotech
標題[求救] OCT會不會讓組織發螢光??
時間Tue Nov 4 11:09:12 2008
現在正在做老鼠組織的冷凍切片~
結果發現切之後,什麼都還沒處理(一抗.二抗都沒加)
在顯微鏡下就可以看到螢光,綠光.紅光.UV都可以看到,其中以綠光最亮
所以現在導致我染上去的都被背景的綠光蓋過~
以下是我的步驟
1.組織取下
2.泡4%PA overnight
3.PBS WASH 3次
4.換20％ surcose 浸泡至要切的時候
5.OCT包埋
6.切片10~12um
直接看就有螢光了!
由於做細胞染色時,我也會用4%PA固定,並沒有出現螢光的問題~
surcose的做法~大家也都有在用,發螢光的可能性不高~
所以目前懷疑是OCT的問題~
想請問版上的各位,有沒有人有同樣的問題~
我們家用的OCT是櫻花牌的~
有推薦其他使用起來沒問題的嗎?
或者是其他方法~
謝謝!!
sorry~更正OCT~
我切的是心臟~~不過我也有切腎臟~兩個都會發螢光
心臟是有自發螢光的說法拉~可是腎臟總不會也有吧~!!
唉~還是其實我養是螢光鼠~(爆)
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◆ From: 140.128.153.200
1F：推 sGoat:自發性螢光? 11/04 11:18
2F：推 HIbaby:肝臟切片有時後會出現自發性螢光 11/04 12:20
3F：推 oopa:原PO說的是OCT嗎? 11/04 13:05
4F：推 formoxa:應該是說OCT吧，我的切片不會耶 11/04 18:23
5F：→ formoxa:但是我不是肝臟 11/04 18:23
※ 編輯: suglaz 來自: 140.128.153.200 (11/05 09:18)
6F：→ suglaz:樓上是用哪個牌子呢~?切哪個部位阿~? 11/05 09:20
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7F：推 DouglasT:有很多器官組織會發生autofluorescence 11/06 03:41
8F：→ DouglasT:hepatocyte, lung epithelium, brain microvessels 11/06 03:41
9F：→ DouglasT:如果觀察重點放在炎症反應區，那就更令人頭痛了 11/06 03:42