作者leoblack (朋友看太重的猫)
看板Biotech
標題[閒聊] datasheet的information能信嘛?!
時間Fri Oct 31 02:53:48 2008
如題
雖然說"不信datasheet, 你還要信啥?"
或是"反正照datasheet做不出來~可以要廠商賠錢啊"~等等
但我還是想來問一下~^^"
就是啊~
最近買了一個要認磷酸化蛋白質的抗體
以往所學到的概念是~由於milk中含有大量的tyrosine~所以會干擾磷酸化的結果~
因此~做磷酸化的western時~最好是用BSA來做blocking~
但我買的那隻抗體datasheet居然說"用5% skim milk" blocking
這令我很傻眼~囧~
雖然試了不行~可以跟廠商argue要他們賠錢~
但sample取得不易~實在沒那個勇氣給他try下去~^^"
以前自己沒做過多少次看磷酸化蛋白的WB~所以上來請教一下其他大大們~
真的有"即使用skim milk blocking,也做得出來的磷酸化WB"嘛!?^^"
感謝~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.62.72.30
1F：推 blence:我用過近十支不同的磷酸化抗體都用milk做的,也都是很順利 10/31 03:06
2F：→ blence:不過我的確不信datasheet的,WB都一致流程,完全不照各家步驟 10/31 03:09
3F：推 tsubasawolfy:可以 有些公司的p-Ab可以用牛奶 10/31 07:30
4F：→ tsubasawolfy:cell signaling的pATM pChk1 pChk2都用milk壓的出來 10/31 07:31
5F：→ tsubasawolfy:但是他的pRb卻要用BSA XD 10/31 07:32
6F：推 tsubasawolfy:不過如果你是要單獨針對p-tyrosine,p-serine,p-threo 10/31 07:34
7F：→ tsubasawolfy:nine的話 你說的就沒錯了- -a 10/31 07:35
8F：→ leoblack:好的~感謝樓上兩位大大~那我姑且信一下datasheet好了^^" 10/31 19:34
9F：推 Seal13:最好的辦法 還是自己試做 因為沒有絕對的方式 11/01 09:19
10F：→ Seal13:通常datasheet就當作參考用 11/01 09:20
11F：→ paua:我用5% milk in TBST, cell signaling的phospho Ab, 11/02 17:25
12F：→ paua:band很明顯, 沒有背景訊號. 11/02 17:26