作者soceress (soceress)
看板Biotech
標題[求救] western transfer後band整個漂移
時間Wed Oct 29 20:20:12 2008
各位好~
目前我做的蛋白質是histone 3, 17kd以下的分子量
SDS page的過程與結果都正常
但transfer後 (溼式,tank是接cooler,120V,90min,
transfer buffer中無SDS,含MeOH 20% )
我的PVDF膜,20多kd以上的marker整個漂散開,像水彩畫那種暈染的感覺
方向是往內的(延伸到第5個lane),不是漂向外側
之前也有些微飄移,但這次格外嚴重
雖然目前不影響到17KD以下,但之後會再做到大一點的分子
想請大家幫幫我,是哪裡出問題?
任何小細節都好!
或是哪一家glycine不好用之類的都好..
感激不盡!!!!
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murmur...在唸碩士班時從沒遇過這種問題說...^^||
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◆ From: 118.165.218.62
1F：推 alaric:確定Gel跑起來沒這現象?? 10/29 20:45
2F：推 sGoat:看一下是不是沒有夾緊,或是transfer的過程中膠縮了 10/29 20:58
3F：→ soceress:嗯,確定gel跑起來很美很正常 10/29 21:24
4F：→ soceress:有夾緊, 但請原諒我才殊學淺..請問膠縮的原因有哪些呢?? 10/29 21:38
5F：推 nutahoshi:有圖嗎?附上來比較好討論.不過縮膠的問題很多耶 10/29 21:42
6F：→ nutahoshi:而且感覺你只有這次特別嚴重.手感很重要!!! 10/29 21:44
7F：推 tsubasawolfy:1.buffer重泡 2.確認有夾緊..有時後雖然要放進tank 10/29 21:57
8F：→ tsubasawolfy:前的確有夾緊 但是跑完之後拿出來看就會漂漂的.. 10/29 21:58
9F：→ tsubasawolfy:至於原因..filter再插入時滑掉(太大張卡邊) 或者海綿 10/29 22:00
10F：→ tsubasawolfy:變薄(用久的會越用越硬薄)..不然就tank過熱膠變大.. 10/29 22:01
11F：→ soceress:謝謝大家的幫忙~明天我會把它拍下來~~ 10/30 03:53