作者soceress (soceress)
看板Biotech
标题[求救] western transfer後band整个漂移
时间Wed Oct 29 20:20:12 2008
各位好~
目前我做的蛋白质是histone 3, 17kd以下的分子量
SDS page的过程与结果都正常
但transfer後 (湿式,tank是接cooler,120V,90min,
transfer buffer中无SDS,含MeOH 20% )
我的PVDF膜,20多kd以上的marker整个漂散开,像水彩画那种晕染的感觉
方向是往内的(延伸到第5个lane),不是漂向外侧
之前也有些微飘移,但这次格外严重
虽然目前不影响到17KD以下,但之後会再做到大一点的分子
想请大家帮帮我,是哪里出问题?
任何小细节都好!
或是哪一家glycine不好用之类的都好..
感激不尽!!!!
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murmur...在念硕士班时从没遇过这种问题说...^^||
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◆ From: 118.165.218.62
1F：推 alaric:确定Gel跑起来没这现象?? 10/29 20:45
2F：推 sGoat:看一下是不是没有夹紧,或是transfer的过程中胶缩了 10/29 20:58
3F：→ soceress:嗯,确定gel跑起来很美很正常 10/29 21:24
4F：→ soceress:有夹紧, 但请原谅我才殊学浅..请问胶缩的原因有哪些呢?? 10/29 21:38
5F：推 nutahoshi:有图吗?附上来比较好讨论.不过缩胶的问题很多耶 10/29 21:42
6F：→ nutahoshi:而且感觉你只有这次特别严重.手感很重要!!! 10/29 21:44
7F：推 tsubasawolfy:1.buffer重泡 2.确认有夹紧..有时後虽然要放进tank 10/29 21:57
8F：→ tsubasawolfy:前的确有夹紧 但是跑完之後拿出来看就会漂漂的.. 10/29 21:58
9F：→ tsubasawolfy:至於原因..filter再插入时滑掉(太大张卡边) 或者海绵 10/29 22:00
10F：→ tsubasawolfy:变薄(用久的会越用越硬薄)..不然就tank过热胶变大.. 10/29 22:01
11F：→ soceress:谢谢大家的帮忙~明天我会把它拍下来~~ 10/30 03:53