作者HenDa (紅色星球椅蜘蛛人)
看板Biotech
標題Re: [轉錄][請益] PCR P不出來
時間Sun Oct 26 12:33:45 2008
※ 引述《qtzbbztq (阿杰)》之銘言：
: ※ [本文轉錄自 Master_D 看板]
: 作者: kiki6565 () 看板: Master_D
: 標題: [請益] PCR P不出來
: 時間: Sun Oct 26 00:00:19 2008
: RT-PCR後的cDNA拿來P 2.3Kbp的基因(coding region)
: 試了很多次conditionc還是p不出來,也找學長姐問過了
: 都說沒p過這麼長的基因
: 想說可能是PCR步驟操作不好
: 就拿實驗室的Ppasmid(含有2Kbp某基因的Promoter)當作control試試
: 是有p出來,但是我要的還是沒出來
: 請問各位有好的建議嗎
RT-PCR用什麼當control? 至少要夾出house keeping
再者 要看RT反應是用dT或hexamer 要夾完整的mRNA可能要用dT
RNA denature要完全 RT酵素也要夠力才行 不然無法做出太長的cDNA
個人是覺得跟PCR步驟沒什麼關係
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◆ From: 118.165.16.223
1F：推 bolly:RT之後的cDNA要完整才行 所以跟你抽RNA應該比較有關係 10/26 15:58
2F：推 damyr:直接作RT-PCR，你的RNA要抽多一點 10/26 16:56
3F：推 cryosakura:什麼樣的gene，你的培養條件下到底會不會表現? 10/27 21:06
4F：→ cryosakura:也是值得注意的問題喔! 10/27 21:07