作者HenDa (红色星球椅蜘蛛人)
看板Biotech
标题Re: [转录][请益] PCR P不出来
时间Sun Oct 26 12:33:45 2008
※ 引述《qtzbbztq (阿杰)》之铭言：
: ※ [本文转录自 Master_D 看板]
: 作者: kiki6565 () 看板: Master_D
: 标题: [请益] PCR P不出来
: 时间: Sun Oct 26 00:00:19 2008
: RT-PCR後的cDNA拿来P 2.3Kbp的基因(coding region)
: 试了很多次conditionc还是p不出来,也找学长姐问过了
: 都说没p过这麽长的基因
: 想说可能是PCR步骤操作不好
: 就拿实验室的Ppasmid(含有2Kbp某基因的Promoter)当作control试试
: 是有p出来,但是我要的还是没出来
: 请问各位有好的建议吗
RT-PCR用什麽当control? 至少要夹出house keeping
再者 要看RT反应是用dT或hexamer 要夹完整的mRNA可能要用dT
RNA denature要完全 RT酵素也要够力才行 不然无法做出太长的cDNA
个人是觉得跟PCR步骤没什麽关系
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.165.16.223
1F：推 bolly:RT之後的cDNA要完整才行 所以跟你抽RNA应该比较有关系 10/26 15:58
2F：推 damyr:直接作RT-PCR，你的RNA要抽多一点 10/26 16:56
3F：推 cryosakura:什麽样的gene，你的培养条件下到底会不会表现? 10/27 21:06
4F：→ cryosakura:也是值得注意的问题喔! 10/27 21:07