作者littlehappy (小小的小快樂)
看板Biotech
標題Re: [求救] 請問有沒有人用抽過動脈的蛋白質?
時間Fri Oct 24 21:39:37 2008
※ 引述《allisa (小晴)》之銘言：
: 我們是取rat的主動脈 要抽partein做western
: 請問有什麼辦法呢? 因為我之前用過的方法好像都不適用
: 之前做brain是直接用玻璃的有一個棒子 把lysis buffer加進去直接磨
: 細胞也是直接加lysis buffer作用30min離心即可
: 但是 動脈用磨的好像磨不碎 組織太韌了 出來的protein很稀
: 而且我們的tissue沒辦法很多 大概只有 1.5cm長而已
: 請問有沒有什麼特殊的方法可以抽出protein呢 謝謝
我是取mice的thoracic aorta來抽protein跑Western Blotting
我的tissue比你小又少的多 >"<
我們家是用Qiagen的Tissuelyser去打成Lysate
把取下來的aorta放進裝有Cell Lysis Buffer和Protease Inhibitor的2ml eppendorf
每管再加入一顆steal bead
然後放進Tissuelyser裡,frequency是25 times/sec
重複打到均質化為止
而aorta很好打到均質化,我同學做鼠耳有耳毛跟軟骨就很討厭
Qiagen的Tissuelyser長這個樣子
http://myurl.com.tw/c801
在打的時候很像搖泡沫紅茶 XD
aorta的total protein一定是比brain的少很多
但是主要是你的target protein訊號要出得來
不然就算total protein量再多都沒有用
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◆ From: 59.127.177.71
1F：推 rele:那台機器要多少錢? 10/24 22:22
我剛剛看了財產牌,上面是寫280000元 囧rz
2F：推 t0ny:諾貝爾那台看過demo感覺很不錯^^ 10/26 03:20
3F：推 allisa:感謝 那用一般的Tissue homogenizer可以嗎? 10/26 04:01
我沒有用過戳戳樂(誤)
所以沒有辦法回答你這個問題 >"<
不過我想只要可以達到均質化的目的又不會污染的話,應該都是可行的
Ps.為什麼大家都可以推文,我卻不能推 /_______________\
※ 編輯: littlehappy 來自: 163.15.175.170 (10/29 13:49)