作者littlehappy (小小的小快乐)
看板Biotech
标题Re: [求救] 请问有没有人用抽过动脉的蛋白质?
时间Fri Oct 24 21:39:37 2008
※ 引述《allisa (小晴)》之铭言：
: 我们是取rat的主动脉 要抽partein做western
: 请问有什麽办法呢? 因为我之前用过的方法好像都不适用
: 之前做brain是直接用玻璃的有一个棒子 把lysis buffer加进去直接磨
: 细胞也是直接加lysis buffer作用30min离心即可
: 但是 动脉用磨的好像磨不碎 组织太韧了 出来的protein很稀
: 而且我们的tissue没办法很多 大概只有 1.5cm长而已
: 请问有没有什麽特殊的方法可以抽出protein呢 谢谢
我是取mice的thoracic aorta来抽protein跑Western Blotting
我的tissue比你小又少的多 >"<
我们家是用Qiagen的Tissuelyser去打成Lysate
把取下来的aorta放进装有Cell Lysis Buffer和Protease Inhibitor的2ml eppendorf
每管再加入一颗steal bead
然後放进Tissuelyser里,frequency是25 times/sec
重复打到均质化为止
而aorta很好打到均质化,我同学做鼠耳有耳毛跟软骨就很讨厌
Qiagen的Tissuelyser长这个样子
http://myurl.com.tw/c801
在打的时候很像摇泡沫红茶 XD
aorta的total protein一定是比brain的少很多
但是主要是你的target protein讯号要出得来
不然就算total protein量再多都没有用
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◆ From: 59.127.177.71
1F：推 rele:那台机器要多少钱? 10/24 22:22
我刚刚看了财产牌,上面是写280000元 囧rz
2F：推 t0ny:诺贝尔那台看过demo感觉很不错^^ 10/26 03:20
3F：推 allisa:感谢 那用一般的Tissue homogenizer可以吗? 10/26 04:01
我没有用过戳戳乐(误)
所以没有办法回答你这个问题 >"<
不过我想只要可以达到均质化的目的又不会污染的话,应该都是可行的
Ps.为什麽大家都可以推文,我却不能推 /_______________\
※ 编辑: littlehappy 来自: 163.15.175.170 (10/29 13:49)