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標 題Re: [方法] 基因轉殖斑馬魚(transgenic fish)的流程?
發信站不良牛牧場 (Thu Oct 23 09:52:26 2008)
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※ 引述《[email protected] (greenday)》之銘言：
: 不知道板上有沒有人是在做transgenic fish的??
: 想請教一下,整個流程的大概,
: 包含construct設計 & 篩選的流程。
基本上你只要先construct你的plasmid
例如promoter(長度因基因特性而異)+reporter gene(GFP等)
plasmid線性化後,每個embryo打入50pg-200pg DNA
基本上打1000個,應該會有10%-20%有transient表現
把這些魚篩選出來等長大後配看看是否有傳給下一代
基本上篩到機率不高,本人做了幾個line只有一個成功
不建議碩士班學生做,
另外也可以用transposon system或其他新系統增加成功率,不過比較麻煩啦
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