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标 题Re: [方法] 基因转殖斑马鱼(transgenic fish)的流程?
发信站不良牛牧场 (Thu Oct 23 09:52:26 2008)
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※ 引述《[email protected] (greenday)》之铭言：
: 不知道板上有没有人是在做transgenic fish的??
: 想请教一下,整个流程的大概,
: 包含construct设计 & 筛选的流程。
基本上你只要先construct你的plasmid
例如promoter(长度因基因特性而异)+reporter gene(GFP等)
plasmid线性化後,每个embryo打入50pg-200pg DNA
基本上打1000个,应该会有10%-20%有transient表现
把这些鱼筛选出来等长大後配看看是否有传给下一代
基本上筛到机率不高,本人做了几个line只有一个成功
不建议硕士班学生做,
另外也可以用transposon system或其他新系统增加成功率,不过比较麻烦啦
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