※ 引述《allisa (小晴)》之銘言： : ※ 引述《ISME0907 (ISME)》之銘言： : : 因為之前不是做切片出身的..有幾個問題想請教一下~ : : 這兩種切片法的比較 : : 1.應用的廣泛性 : : 比如說是不是冷凍切片可以做很多染色實驗(immunostain)..但是石蠟切片只可以做 : : HE stain : 冷凍跟石蠟都可以做免疫染色(螢光,DAB呈色) 也都可以做HE stain : 不過像是皮膚還有一些軟組織要做HE的話 用石蠟包埋比較能完整看到結構 H&E stain是最基本的染色,兩種處理都可以染,只是步驟不同 不過如果是做免疫染色的話,通常比較偏好使用冷凍切片去做 因為冷凍切片tissue的epitope比較不受影響 : : 2.sample的薄度差異 : : 或許說..哪個靈敏度較高? : 石蠟比較好切到很薄(6 um以下都很ok) 不過冷凍要切到6um比較難喔 因為石蠟切片block的製作過程需要脫水侵蠟 冷凍切片通常過後固定後,經過sucrose替換,再用OCT包埋成block 所以石蠟的block相對來說比較硬,可切到比較薄 不過還是要看組織的特性 我是做小鼠aorta切片,冷凍切片也有切過1μm : : 3.保存性 : : 何者可以保存較久? : 石蠟的蠟塊跟白片保存好的話放好幾年都沒問題 不過冷凍如果切完片了 : 不馬上染 有時候很容易tissue會有霜就會有點破碎了 石蠟的block保存的比冷凍切片好且久 不過記得要放盒子裡收好...(我的被蟑螂啃過 Orz) : : 4.操作方便性 : : 何者較快..比較無毒性之類的 : 冷凍比較快 不管是組織脫水包埋 到染色的步驟 冷凍切片都會比較快 冷凍切片的block製作比較快,步驟也較簡單 以我的小鼠aorta來說,冷凍的tissue只要前一天用sucrose替換over-night後 隔天上OCT馬上可以切 石蠟block的脫水、侵蠟到包埋就要從早上8點做到晚上7點 不過石蠟block有用脫水機做會比較方便,但是我是用人工慢慢換 ^^" 石蠟切片的步驟會用到二甲苯,苯類的東西是芳香族,所以相對毒性比較高 所以二甲苯要在hood裡操作(不過他的毒性在lab裡算很低) : : 印象中好像石蠟切片也可以做抗體抗原的染色實驗..但會不會因為實驗中加了甲醛 : : 雖然染色前好像會先做一些處理..但是會不會影響染色實驗壓~..還是大家再做抗體 : : 抗原染色..比較偏好冷凍切片的sample... : 染螢光的會比較偏好用冷凍 其他還好唷 因為石蠟可以放很久 保存比較方便 : 隨時要補都還可以再拿片子出來染 : 不過不知道其他人的習慣如何 好像也有人的觀念跟你認為的差不多 也是有免疫染色可以用石蠟切片做 不過通常會先經過一個Sodium Citrate Buffer讓它的epitope活化 但是因為石蠟block裡tissue的固定液對epitope的型態有影響 所以免疫染色大部分還是用冷凍切片去做 : : 還有一個問題喔..聽說切片後的sample如果再去抽DNA或RNA..它的量都非常少.. : : 我本來以為切片實驗的過程中已加入的甲醛..不是已經破壞很多蛋白質了嗎? : : 那DNA或RNA的量為何會減少壓? : : 請教大家囉~ : 我覺得是因為切完片的sample如果要抽DNA RNA容易lost掉比較多 所以抽到的量才會很少 : 不過這是我的猜測 Formalin或Glutaraldehyde使蛋白質變性達到固定效果 而他們會造成DNA fragmentation和RNA damage 不過有公司出了號稱不會讓DNA、RNA受損的固定液 我是有拿了試用品,不過沒有用...所以也沒有辦法告訴你效果如何 >"< -- ╮ ‧ ﹒ ║ 、 。 ﹒ ’ ║‧ ＊ ╪ ┼ ║ ╭═╮╠═╮╭═╮ ╔═╮╔═╮ ◣ ◢ ║ ﹒║ ║ ║ ║ ╠═╝║﹒║╭═╣ ║ ║║ ║║ ║ ▕︵ ︵▏ ╰═╯╰ ╰ ╰ ╰ ╰═╯╰ ╰╰═╰ ╠═╯╠═╯╰═╣ ▋= - = ▎ ． 。 ． ╩ ﹒ ╩ ‘ ╰─╯ ▄▃▄ ． ‥ ◣﹚ --

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