※ 引述《allisa (小晴)》之铭言： : ※ 引述《ISME0907 (ISME)》之铭言： : : 因为之前不是做切片出身的..有几个问题想请教一下~ : : 这两种切片法的比较 : : 1.应用的广泛性 : : 比如说是不是冷冻切片可以做很多染色实验(immunostain)..但是石蜡切片只可以做 : : HE stain : 冷冻跟石蜡都可以做免疫染色(萤光,DAB呈色) 也都可以做HE stain : 不过像是皮肤还有一些软组织要做HE的话 用石蜡包埋比较能完整看到结构 H&E stain是最基本的染色,两种处理都可以染,只是步骤不同 不过如果是做免疫染色的话,通常比较偏好使用冷冻切片去做 因为冷冻切片tissue的epitope比较不受影响 : : 2.sample的薄度差异 : : 或许说..哪个灵敏度较高? : 石蜡比较好切到很薄(6 um以下都很ok) 不过冷冻要切到6um比较难喔 因为石蜡切片block的制作过程需要脱水侵蜡 冷冻切片通常过後固定後,经过sucrose替换,再用OCT包埋成block 所以石蜡的block相对来说比较硬,可切到比较薄 不过还是要看组织的特性 我是做小鼠aorta切片,冷冻切片也有切过1μm : : 3.保存性 : : 何者可以保存较久? : 石蜡的蜡块跟白片保存好的话放好几年都没问题 不过冷冻如果切完片了 : 不马上染 有时候很容易tissue会有霜就会有点破碎了 石蜡的block保存的比冷冻切片好且久 不过记得要放盒子里收好...(我的被蟑螂啃过 Orz) : : 4.操作方便性 : : 何者较快..比较无毒性之类的 : 冷冻比较快 不管是组织脱水包埋 到染色的步骤 冷冻切片都会比较快 冷冻切片的block制作比较快,步骤也较简单 以我的小鼠aorta来说,冷冻的tissue只要前一天用sucrose替换over-night後 隔天上OCT马上可以切 石蜡block的脱水、侵蜡到包埋就要从早上8点做到晚上7点 不过石蜡block有用脱水机做会比较方便,但是我是用人工慢慢换 ^^" 石蜡切片的步骤会用到二甲苯,苯类的东西是芳香族,所以相对毒性比较高 所以二甲苯要在hood里操作(不过他的毒性在lab里算很低) : : 印象中好像石蜡切片也可以做抗体抗原的染色实验..但会不会因为实验中加了甲醛 : : 虽然染色前好像会先做一些处理..但是会不会影响染色实验压~..还是大家再做抗体 : : 抗原染色..比较偏好冷冻切片的sample... : 染萤光的会比较偏好用冷冻 其他还好唷 因为石蜡可以放很久 保存比较方便 : 随时要补都还可以再拿片子出来染 : 不过不知道其他人的习惯如何 好像也有人的观念跟你认为的差不多 也是有免疫染色可以用石蜡切片做 不过通常会先经过一个Sodium Citrate Buffer让它的epitope活化 但是因为石蜡block里tissue的固定液对epitope的型态有影响 所以免疫染色大部分还是用冷冻切片去做 : : 还有一个问题喔..听说切片後的sample如果再去抽DNA或RNA..它的量都非常少.. : : 我本来以为切片实验的过程中已加入的甲醛..不是已经破坏很多蛋白质了吗? : : 那DNA或RNA的量为何会减少压? : : 请教大家罗~ : 我觉得是因为切完片的sample如果要抽DNA RNA容易lost掉比较多 所以抽到的量才会很少 : 不过这是我的猜测 Formalin或Glutaraldehyde使蛋白质变性达到固定效果 而他们会造成DNA fragmentation和RNA damage 不过有公司出了号称不会让DNA、RNA受损的固定液 我是有拿了试用品,不过没有用...所以也没有办法告诉你效果如何 >"< -- ╮ ‧ ﹒ ║ 、 。 ﹒ ’ ║‧ ＊ ╪ ┼ ║ ╭═╮╠═╮╭═╮ ╔═╮╔═╮ ◣ ◢ ║ ﹒║ ║ ║ ║ ╠═╝║﹒║╭═╣ ║ ║║ ║║ ║ ▕︵ ︵▏ ╰═╯╰ ╰ ╰ ╰ ╰═╯╰ ╰╰═╰ ╠═╯╠═╯╰═╣ ▋= - = ▎ ． 。 ． ╩ ﹒ ╩ ‘ ╰─╯ ▄▃▄ ． ‥ ◣﹚ --

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