作者bolly (bolly)
看板Biotech
標題[討論] pET-30a
時間Tue Oct 21 11:02:22 2008
pET-30a這載體我想要轉到DH5alpha
mini-prep抽plasmid 但是抽出的plasmid量總是很低
我再養菌的LB裡有加抗生素 E. coli也都長很好
可是抽出來的plasmid就是很少
這跟我用的菌種有關嗎? 還是大家都用買的= =
我的操作是按照mini-prep kit給的protocol 基本上應該不是操作問題
至於我取的菌量是飽和菌液約2.5ml
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.202.50
1F：推 tsubasawolfy:有確定它的copy number高嗎- -? 10/21 11:19
2F：→ tsubasawolfy:pET我用過兩個都是要加多菌量 10/21 11:20
※ 編輯: bolly 來自: 140.120.202.50 (10/21 11:44)
3F：→ bolly:所以大概需要加多少量 10/21 11:44
4F：推 mtdas:養多久? 10/21 12:23
5F：→ bolly:over night的菌液 10/21 12:26
6F：→ bolly:我通常會養12-14hr 10/21 12:27
7F：→ mtdas:確認一下Ap有無壞掉? (我遇過Ap壞掉的) 10/21 12:33
8F：推 micocat:pET系列都是low copy 10/21 13:04
9F：→ micocat:copy number大概是high copy 例如t-vector 的10分之1 10/21 13:05
10F：→ micocat:所以… 養多一點吧~~ 10/21 13:05
11F：推 tsubasawolfy:養五取四:) 10/21 13:53
12F：→ bolly:瞭解了 感恩 以後把量加多 10/21 16:25
13F：推 silverberry:pET 系列 copy number 約 40, 比起 high copy 的數百 10/22 02:18
14F：→ silverberry:少太多了@@ 我們家養 6 mL mini-prep 抽成 50 uL 10/22 02:19
15F：→ bolly:我之前大概6ml回溶100ul 難怪挺少的 10/22 15:56