作者bolly (bolly)
看板Biotech
标题[讨论] pET-30a
时间Tue Oct 21 11:02:22 2008
pET-30a这载体我想要转到DH5alpha
mini-prep抽plasmid 但是抽出的plasmid量总是很低
我再养菌的LB里有加抗生素 E. coli也都长很好
可是抽出来的plasmid就是很少
这跟我用的菌种有关吗? 还是大家都用买的= =
我的操作是按照mini-prep kit给的protocol 基本上应该不是操作问题
至於我取的菌量是饱和菌液约2.5ml
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.202.50
1F：推 tsubasawolfy:有确定它的copy number高吗- -? 10/21 11:19
2F：→ tsubasawolfy:pET我用过两个都是要加多菌量 10/21 11:20
※ 编辑: bolly 来自: 140.120.202.50 (10/21 11:44)
3F：→ bolly:所以大概需要加多少量 10/21 11:44
4F：推 mtdas:养多久? 10/21 12:23
5F：→ bolly:over night的菌液 10/21 12:26
6F：→ bolly:我通常会养12-14hr 10/21 12:27
7F：→ mtdas:确认一下Ap有无坏掉? (我遇过Ap坏掉的) 10/21 12:33
8F：推 micocat:pET系列都是low copy 10/21 13:04
9F：→ micocat:copy number大概是high copy 例如t-vector 的10分之1 10/21 13:05
10F：→ micocat:所以… 养多一点吧~~ 10/21 13:05
11F：推 tsubasawolfy:养五取四:) 10/21 13:53
12F：→ bolly:了解了 感恩 以後把量加多 10/21 16:25
13F：推 silverberry:pET 系列 copy number 约 40, 比起 high copy 的数百 10/22 02:18
14F：→ silverberry:少太多了@@ 我们家养 6 mL mini-prep 抽成 50 uL 10/22 02:19
15F：→ bolly:我之前大概6ml回溶100ul 难怪挺少的 10/22 15:56