作者ligase (真的不是距離)
看板Biotech
標題[求救] HEK293T transfection condition
時間Tue Oct 14 10:04:04 2008
我之前試過HEK293T做transfection
condition如下:
10cm dish, 80% confluency
分別做:
DNA(2ug)+1.5cc Opti-MEM
Lipofectamine 2000(5ul)+1.5cc Opti-MEM
各混合5mins, RT
然後兩個mix, incubate for 20mins
再加入細胞當中。
細胞沒有serum starvation, 是要加的時候才把medium全部吸掉
換入DNA+lipofectamine 2000以及Opti-MEM mixture
然後incubate for 6~8 hours,再換掉所有的medium,加入complete medium
但是efficiency只有約40%
想要麻煩大家幫我看看，或者是要怎麼做，才能增加他的效率
因為我的實驗，一定要高產量的transfected protein
麻煩大家了，謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.253.190
1F：推 liuse:為啥不用calcium phosphate來做transfection呢? 10/14 10:17
2F：→ liuse:293T用lipo會死一堆吧 10/14 10:18
3F：→ ligase:之前lab用lipo,沒注意到可以用calcium..><..可以分享方法嗎 10/14 10:34
4F：推 vancent:用電的吧~效率超高也不會死很多~推AMAXA的NUCLEOFECTION 10/14 11:23
5F：→ vancent:之前一株用LIPO大概一兩成~TRY過很多DOSE~用電的變七八成 10/14 11:24
6F：→ ligase:我們實驗室沒有電的system,可能就無法考慮這個方法了,sorry 10/14 11:37
7F：推 Ithilloth:我們家都用lipo2000 transfect 293T 活得好好的啊 10/14 11:47
8F：→ Ithilloth:invitrogen官方的protocol說10cm dish可以放到24ug DNA 10/14 11:49
9F：→ Ithilloth:lipo2000用60ul 剩下的步驟都一樣 10/14 11:51
10F：推 liuse:lipo很貴耶 能省就省著點吧 10/14 14:54
11F：→ liuse:磷酸鈣protocol我再寄給原PO 10/14 14:55