作者ligase (真的不是距离)
看板Biotech
标题[求救] HEK293T transfection condition
时间Tue Oct 14 10:04:04 2008
我之前试过HEK293T做transfection
condition如下:
10cm dish, 80% confluency
分别做:
DNA(2ug)+1.5cc Opti-MEM
Lipofectamine 2000(5ul)+1.5cc Opti-MEM
各混合5mins, RT
然後两个mix, incubate for 20mins
再加入细胞当中。
细胞没有serum starvation, 是要加的时候才把medium全部吸掉
换入DNA+lipofectamine 2000以及Opti-MEM mixture
然後incubate for 6~8 hours,再换掉所有的medium,加入complete medium
但是efficiency只有约40%
想要麻烦大家帮我看看，或者是要怎麽做，才能增加他的效率
因为我的实验，一定要高产量的transfected protein
麻烦大家了，谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.253.190
1F：推 liuse:为啥不用calcium phosphate来做transfection呢? 10/14 10:17
2F：→ liuse:293T用lipo会死一堆吧 10/14 10:18
3F：→ ligase:之前lab用lipo,没注意到可以用calcium..><..可以分享方法吗 10/14 10:34
4F：推 vancent:用电的吧~效率超高也不会死很多~推AMAXA的NUCLEOFECTION 10/14 11:23
5F：→ vancent:之前一株用LIPO大概一两成~TRY过很多DOSE~用电的变七八成 10/14 11:24
6F：→ ligase:我们实验室没有电的system,可能就无法考虑这个方法了,sorry 10/14 11:37
7F：推 Ithilloth:我们家都用lipo2000 transfect 293T 活得好好的啊 10/14 11:47
8F：→ Ithilloth:invitrogen官方的protocol说10cm dish可以放到24ug DNA 10/14 11:49
9F：→ Ithilloth:lipo2000用60ul 剩下的步骤都一样 10/14 11:51
10F：推 liuse:lipo很贵耶 能省就省着点吧 10/14 14:54
11F：→ liuse:磷酸钙protocol我再寄给原PO 10/14 14:55