作者sinlu (懶的換暱稱!!)
看板Biotech
標題[求救] 有關real-time PCR
時間Sun Oct 12 23:41:01 2008
請問一下~
關於Real-time PCR測得的copy number數
因為 我做的樣品濃度都很低
當copy number太低時 會導致Ct值都會約38-39才上升
而且 這時候都會三重複都有點誤差
之前有問過前人 她跟我說即使是做standard curve
也沒辦法做到這麼低的copy number 量太低時也都會"飄"掉(三重複有誤差)
所以 想請問一下
若我遇到這種情況 我應該就直接把Ct值大於38的直接忽略掉
當作沒測到嗎?@@
可是 這樣也蠻奇怪的
因為我的Health是不會上升
若把Ct值大於37忽略掉 這樣感覺上有點怪
但若硬要說它有 卻得到的數據沒有那麼準確
(因為連standard curve最後也都不太準了)
請問 有人有好的建議或參考資料可以看嗎? 謝謝^^
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.62.92.63
1F：推 willieh:第一，你的樣品有稀釋嗎？若有記得別稀釋太多倍。 10/12 23:46
2F：→ willieh:第二，試著將std cuv往後拉，若在37,38還有線性，就OK！ 10/12 23:47
3F：→ sinlu:有稀釋 可是我還是把量設定在ABI跟我講的範圍內 10/13 00:23
4F：→ sinlu:因為 他們跟我說 template量太多 有時候反而會影響結果 10/13 00:24
5F：→ sinlu:所以 我就沒有改濃度 10/13 00:24
6F：→ sinlu:嗯嗯 我目前也是將standard curve往後啦 盡量測多點 10/13 00:25
7F：→ sinlu:所以 standard curve最多也只能測到Ct 37-38左右嗎 10/13 00:26
8F：→ sinlu:謝謝^^ 10/13 00:27
9F：推 huangsw:有用melting curve看過嗎 38 39有的時候是非特異性 要小心 10/13 00:36
10F：推 willieh:不過你目前是template不足，增加template量應該沒問題 10/13 00:59
11F：→ willieh:若是擔心n-spc binding，檢查Mt就會知道了(primer決定...) 10/13 01:02
12F：→ willieh:我也試過加倍primer(0.5uM→1uM)，有時會有幫助..抱歉縮寫 10/13 01:05
13F：→ sinlu:我做的是TAGMAN 抱歉 忘了說 10/13 01:32
14F：推 willieh:啊...那抱歉了，我的是SYBR G的經驗.... 10/13 01:42
15F：→ sinlu:沒關係@@ 還是謝謝你 10/13 02:12
16F：推 candy315:通常Ct值要控制在15~30內，會被認為數據比較可信喔 10/14 22:18
17F：→ candy315:當然如果你CT38也在standard curve的線性上，應該也OK啦 10/14 22:19