作者sinlu (懒的换昵称!!)
看板Biotech
标题[求救] 有关real-time PCR
时间Sun Oct 12 23:41:01 2008
请问一下~
关於Real-time PCR测得的copy number数
因为 我做的样品浓度都很低
当copy number太低时 会导致Ct值都会约38-39才上升
而且 这时候都会三重复都有点误差
之前有问过前人 她跟我说即使是做standard curve
也没办法做到这麽低的copy number 量太低时也都会"飘"掉(三重复有误差)
所以 想请问一下
若我遇到这种情况 我应该就直接把Ct值大於38的直接忽略掉
当作没测到吗?@@
可是 这样也蛮奇怪的
因为我的Health是不会上升
若把Ct值大於37忽略掉 这样感觉上有点怪
但若硬要说它有 却得到的数据没有那麽准确
(因为连standard curve最後也都不太准了)
请问 有人有好的建议或参考资料可以看吗? 谢谢^^
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.62.92.63
1F：推 willieh:第一，你的样品有稀释吗？若有记得别稀释太多倍。 10/12 23:46
2F：→ willieh:第二，试着将std cuv往後拉，若在37,38还有线性，就OK！ 10/12 23:47
3F：→ sinlu:有稀释 可是我还是把量设定在ABI跟我讲的范围内 10/13 00:23
4F：→ sinlu:因为 他们跟我说 template量太多 有时候反而会影响结果 10/13 00:24
5F：→ sinlu:所以 我就没有改浓度 10/13 00:24
6F：→ sinlu:嗯嗯 我目前也是将standard curve往後啦 尽量测多点 10/13 00:25
7F：→ sinlu:所以 standard curve最多也只能测到Ct 37-38左右吗 10/13 00:26
8F：→ sinlu:谢谢^^ 10/13 00:27
9F：推 huangsw:有用melting curve看过吗 38 39有的时候是非特异性 要小心 10/13 00:36
10F：推 willieh:不过你目前是template不足，增加template量应该没问题 10/13 00:59
11F：→ willieh:若是担心n-spc binding，检查Mt就会知道了(primer决定...) 10/13 01:02
12F：→ willieh:我也试过加倍primer(0.5uM→1uM)，有时会有帮助..抱歉缩写 10/13 01:05
13F：→ sinlu:我做的是TAGMAN 抱歉 忘了说 10/13 01:32
14F：推 willieh:啊...那抱歉了，我的是SYBR G的经验.... 10/13 01:42
15F：→ sinlu:没关系@@ 还是谢谢你 10/13 02:12
16F：推 candy315:通常Ct值要控制在15~30内，会被认为数据比较可信喔 10/14 22:18
17F：→ candy315:当然如果你CT38也在standard curve的线性上，应该也OK啦 10/14 22:19