作者MDPV (小護士的心聲)
看板Biotech
標題[求救] 切不出insert
時間Sun Oct 12 17:12:48 2008
各位前輩~~~
我想請問:
我已經將我的insert cloning到pGEM T-Easy vector(3015bp)內,plasmid
也經過定序過，確定有cloning進去
然後將整個palsmid，transformation入DH5a內，
抽取plasmid想確定是否還含有我想要的insert，
我使用RE為:EcoRI&SacI
不知道是不是因為INSERT比較短(23bp)，還是根本沒有insert
跑膠後一直沒有看到<100bp的band，
只看到一條約3000bp的band?
也問過老師，老師說 可能因為insert比較短看不見
所以 我一直在找辦法
之前也上來問過前輩們
也用過2-3%Agarose跑過
還是看不見
所以 想請教各位前輩 不知道可不可以提供我一些建議
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 218.173.238.163
1F：推 blence:你之前的文章寫83bp？ 這差很多喔 10/12 17:28
2F：推 polyhedron:看不見的。小片段和大片段等摩爾的話﹐小片段長度不到 10/12 18:16
3F：→ polyhedron:大片段百分之一﹐自然帶的強度也不到百分之一 10/12 18:16
4F：推 chvkimo:定序 三天左右就出來了, 我待的實驗室是這樣作 10/12 22:38
5F：推 yaliu:我也覺得定序可以很快知道 10/13 00:03
6F：→ yaliu:另外，那你之前是怎麼樣接進去pGEMT-easy的?不是用PCR產物? 10/13 00:04
7F：→ yaliu:之前P完應該有跑膠吧.....不過23bp真的很小，片段越小電泳 10/13 00:05
8F：→ yaliu:越難看到..... 10/13 00:05
9F：推 NKTcell:光是抽plasmid來切 是不可能看到那條的 10/13 02:00
10F：→ NKTcell:要有多少條23bp 上面嵌有EtBr才能被看見? 不可能看的見的 10/13 02:02