作者MDPV (小护士的心声)
看板Biotech
标题[求救] 切不出insert
时间Sun Oct 12 17:12:48 2008
各位前辈~~~
我想请问:
我已经将我的insert cloning到pGEM T-Easy vector(3015bp)内,plasmid
也经过定序过，确定有cloning进去
然後将整个palsmid，transformation入DH5a内，
抽取plasmid想确定是否还含有我想要的insert，
我使用RE为:EcoRI&SacI
不知道是不是因为INSERT比较短(23bp)，还是根本没有insert
跑胶後一直没有看到<100bp的band，
只看到一条约3000bp的band?
也问过老师，老师说 可能因为insert比较短看不见
所以 我一直在找办法
之前也上来问过前辈们
也用过2-3%Agarose跑过
还是看不见
所以 想请教各位前辈 不知道可不可以提供我一些建议
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 218.173.238.163
1F：推 blence:你之前的文章写83bp？ 这差很多喔 10/12 17:28
2F：推 polyhedron:看不见的。小片段和大片段等摩尔的话﹐小片段长度不到 10/12 18:16
3F：→ polyhedron:大片段百分之一﹐自然带的强度也不到百分之一 10/12 18:16
4F：推 chvkimo:定序 三天左右就出来了, 我待的实验室是这样作 10/12 22:38
5F：推 yaliu:我也觉得定序可以很快知道 10/13 00:03
6F：→ yaliu:另外，那你之前是怎麽样接进去pGEMT-easy的?不是用PCR产物? 10/13 00:04
7F：→ yaliu:之前P完应该有跑胶吧.....不过23bp真的很小，片段越小电泳 10/13 00:05
8F：→ yaliu:越难看到..... 10/13 00:05
9F：推 NKTcell:光是抽plasmid来切 是不可能看到那条的 10/13 02:00
10F：→ NKTcell:要有多少条23bp 上面嵌有EtBr才能被看见? 不可能看的见的 10/13 02:02