作者afk2768 (AFK)
看板Biotech
標題[求救] 請問關於lentivirus的製備以及titer的問題
時間Thu Oct 9 15:06:36 2008
各位先進 前輩 大家好
小弟現在使用中研院RNAi core的plasmid來製備lentivirus
我的方法如下:
第一天時 Seeding 5X10^5 HEK293T cells 在6 well plate中
第二天時 以lipofectamine 10ul + plasmid (pLKO.1-shRNA pCMV-delta 8.91 pMD.G各
2ug) + 1ml serum-fREE DMEM做transfection,在transfection 4小時後
換成3ml30%FBS DMEM,之後在transfection後24小時 48小時收病毒
但是所收到的病毒以RNAi core上提供的RIU方式來測titer
(不同處為我是使用HEK293T cell 而且在最後一天時我是以MTT來觀察細胞的viability)
可是發現所得到的病毒 titer非常差 細胞的survival rate最高只有10%
請問我有哪個步驟需要做改善或調整 才能使我的lentivirus有更好的titer
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.77.155
1F：推 aceliang:我也正在做耶...不過是第一次= =a 10/09 17:30
2F：推 leoblack:30%FBS會不會太高啊~我們都減半耶~減少FBS中和virus 10/09 18:31
3F：→ leoblack:可以試試10%FBS養就可以了~且transfection完直接補medium 10/09 18:32
4F：→ leoblack:不要去除transfection的medium 10/09 18:33
5F：→ leoblack:ps.10%FBS是沒有減半的量,狀況好的話可以改用5%FBS就好了 10/09 18:34
6F：→ leoblack:另外~pLKO.1和另外1個helper plasmid不是有固定比例?! 10/09 18:35
7F：→ leoblack:helper plasmid是用來幫助package的,太多會都是空包彈 10/09 18:35
8F：推 Groger:中研院系統有點怪怪的,最好換一套系統!! 10/10 11:25