作者afk2768 (AFK)
看板Biotech
标题[求救] 请问关於lentivirus的制备以及titer的问题
时间Thu Oct 9 15:06:36 2008
各位先进 前辈 大家好
小弟现在使用中研院RNAi core的plasmid来制备lentivirus
我的方法如下:
第一天时 Seeding 5X10^5 HEK293T cells 在6 well plate中
第二天时 以lipofectamine 10ul + plasmid (pLKO.1-shRNA pCMV-delta 8.91 pMD.G各
2ug) + 1ml serum-fREE DMEM做transfection,在transfection 4小时後
换成3ml30%FBS DMEM,之後在transfection後24小时 48小时收病毒
但是所收到的病毒以RNAi core上提供的RIU方式来测titer
(不同处为我是使用HEK293T cell 而且在最後一天时我是以MTT来观察细胞的viability)
可是发现所得到的病毒 titer非常差 细胞的survival rate最高只有10%
请问我有哪个步骤需要做改善或调整 才能使我的lentivirus有更好的titer
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.77.155
1F：推 aceliang:我也正在做耶...不过是第一次= =a 10/09 17:30
2F：推 leoblack:30%FBS会不会太高啊~我们都减半耶~减少FBS中和virus 10/09 18:31
3F：→ leoblack:可以试试10%FBS养就可以了~且transfection完直接补medium 10/09 18:32
4F：→ leoblack:不要去除transfection的medium 10/09 18:33
5F：→ leoblack:ps.10%FBS是没有减半的量,状况好的话可以改用5%FBS就好了 10/09 18:34
6F：→ leoblack:另外~pLKO.1和另外1个helper plasmid不是有固定比例?! 10/09 18:35
7F：→ leoblack:helper plasmid是用来帮助package的,太多会都是空包弹 10/09 18:35
8F：推 Groger:中研院系统有点怪怪的,最好换一套系统!! 10/10 11:25