作者mimosasky (浪者天涯)
看板Biotech
標題Re: [方法] 一樣想問萃取蛋白質的方法
時間Sat Oct 4 23:30:01 2008
※ 引述《amit (no)》之銘言：
: 想請問各位 如果要收很多的時間點
: 就要先把細胞先收集起來
: 我之前的方法是把盤子整個凍在-80
: 但是拿出來加lysis buffer的時候 體積會多出一倍多
: 所以參考了前面幾篇的方法 用PBS刮細胞再離心
: 可是我用1500rpm 離心十分鐘後
: 發現用tip吸supernatant 會有很多懸浮的細胞耶!!!!
: 感覺loss很多細胞>"< 而且我的細胞是primary culture原本就不多了
: 是不是我離心的轉速不對呢???
除了用細胞刮刀先將細胞刮下的方法外
我們實驗室之前有用另一方法
提出來大家一起討論看看
先去除medium後以HBSS wash
再以1X trypsin-EDTA (1mM)將細胞切下
以HBSS (PBS也可以）沖洗下細胞
放入1.5ml tube中離心
去除上清液後改放入lysis bfr.
再用sonicator震碎細胞
再離心取留上清液
將細胞這麼凍起來...
細胞不會破掉嗎？
對抽取蛋白質不會影響嗎？
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.114.221.66
1F：推 leoblack:如果去除上清液後~在沒有lysis buffer情況下,細胞沒那麼 10/05 02:14
2F：→ leoblack:容易破 10/05 02:15