作者mimosasky (浪者天涯)
看板Biotech
标题Re: [方法] 一样想问萃取蛋白质的方法
时间Sat Oct 4 23:30:01 2008
※ 引述《amit (no)》之铭言：
: 想请问各位 如果要收很多的时间点
: 就要先把细胞先收集起来
: 我之前的方法是把盘子整个冻在-80
: 但是拿出来加lysis buffer的时候 体积会多出一倍多
: 所以参考了前面几篇的方法 用PBS刮细胞再离心
: 可是我用1500rpm 离心十分钟後
: 发现用tip吸supernatant 会有很多悬浮的细胞耶!!!!
: 感觉loss很多细胞>"< 而且我的细胞是primary culture原本就不多了
: 是不是我离心的转速不对呢???
除了用细胞刮刀先将细胞刮下的方法外
我们实验室之前有用另一方法
提出来大家一起讨论看看
先去除medium後以HBSS wash
再以1X trypsin-EDTA (1mM)将细胞切下
以HBSS (PBS也可以）冲洗下细胞
放入1.5ml tube中离心
去除上清液後改放入lysis bfr.
再用sonicator震碎细胞
再离心取留上清液
将细胞这麽冻起来...
细胞不会破掉吗？
对抽取蛋白质不会影响吗？
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.114.221.66
1F：推 leoblack:如果去除上清液後~在没有lysis buffer情况下,细胞没那麽 10/05 02:14
2F：→ leoblack:容易破 10/05 02:15