作者MDPV (鴨小病毒)
看板Biotech
標題Re: 關於DNA polyacylamide
時間Sat Oct 4 00:10:38 2008
※ 引述《MDPV (鴨小病毒)》之銘言：
: 各位前輩
: 不知道有沒有人有使用polyacylamide 跑DNA
: 因為我的dna band很小
: 所以要用此方法
: 不過已經試了好多方法
: 不知誰可以救我一下
: 謝謝~~~~
: 可以附上protoc嗎
sorry 我沒有寫清楚~~~
我DNA polyacylamide濃度如下:
GEL% 20%
30% acylamide 8ml
H2O 1.6ml
5x TBE 2.4ml
10%APS 200ul
TEMED 10ul
以65V預跑30分鐘後，loading sample後，以65V跑4.5小時
可是我出現的問題如下:
1.我製作出的膠孔洞中會有類似纖維狀的東西 無法讓我loading東西
2.看不出想要的band 連dna marker都看不見
3.請問各位前輩 我需要像跑SDS-PAGE有上下膠嗎
4.如果我的dna只有83bp，我大概要跑到什麼位置?
因為對實驗沒接觸過 所以煩請各位幫忙 謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 218.173.227.222
1F：推 bonbonyaho:配方怪怪的耶...哪來的阿 10/04 00:16
2F：推 bonbonyaho:感覺像是沒凝阿 10/04 00:18
3F：推 jademan:83 bp 跑2.0%以上的agarose gel也可以分啊! 10/04 01:12
4F：推 williamyang:通常拔下comb之後,請以buffer沖洗可能為凝結的殘留gel 10/04 08:12
5F：→ williamyang:跑DNA用的我以前是沒有用stacking gel(就是上膠) 10/04 08:13
6F：推 williamyang:還有跑的時間好像有點不夠,以前我run的size約100多bp 10/04 08:21
7F：→ williamyang:用15cm的12% gel,70V也要run 14 hrs 10/04 08:23
8F：推 runpapa0520:dna acryamide 要用19：1的，另外不用用到20％吧 10/04 11:51
9F：推 damyr:配太高了，而且跑這麼久DNA不會smear掉? 10/04 13:32
10F：推 williamyang:回樓上,不會smear,不過會怕過熱,跑出的band就微笑了.. 10/04 13:57
11F：推 bigbean:molecular cloning上面有要分多少bp要用多少%gel的對照表. 10/04 21:37
12F：→ bigbean:至於跑的位子..我是看dna loading dye跑的位子決定.. 10/04 21:37
13F：→ bigbean:一開始先試著跑marker, 等確定條件後再跑sample吧 10/04 21:38
14F：推 dankai:1.在跑之前用running buffer把well沖一下~ 2.你的染色會不 10/04 22:30
15F：→ dankai:會已經出問題..因為你的marker看不見! 3.我們是配上下的~當 10/04 22:32
16F：→ dankai:初是跑AFLP的產物..如果是single band我認為配agarose的就 10/04 22:35
17F：→ dankai:可以了耶~我配4%的!!試試吧~ 10/04 22:36
18F：推 dankai:你的sample跑之前有跟loading buffer預煮過嗎!? 10/04 22:43