作者MDPV (鸭小病毒)
看板Biotech
标题Re: 关於DNA polyacylamide
时间Sat Oct 4 00:10:38 2008
※ 引述《MDPV (鸭小病毒)》之铭言：
: 各位前辈
: 不知道有没有人有使用polyacylamide 跑DNA
: 因为我的dna band很小
: 所以要用此方法
: 不过已经试了好多方法
: 不知谁可以救我一下
: 谢谢~~~~
: 可以附上protoc吗
sorry 我没有写清楚~~~
我DNA polyacylamide浓度如下:
GEL% 20%
30% acylamide 8ml
H2O 1.6ml
5x TBE 2.4ml
10%APS 200ul
TEMED 10ul
以65V预跑30分钟後，loading sample後，以65V跑4.5小时
可是我出现的问题如下:
1.我制作出的胶孔洞中会有类似纤维状的东西 无法让我loading东西
2.看不出想要的band 连dna marker都看不见
3.请问各位前辈 我需要像跑SDS-PAGE有上下胶吗
4.如果我的dna只有83bp，我大概要跑到什麽位置?
因为对实验没接触过 所以烦请各位帮忙 谢谢
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 218.173.227.222
1F：推 bonbonyaho:配方怪怪的耶...哪来的阿 10/04 00:16
2F：推 bonbonyaho:感觉像是没凝阿 10/04 00:18
3F：推 jademan:83 bp 跑2.0%以上的agarose gel也可以分啊! 10/04 01:12
4F：推 williamyang:通常拔下comb之後,请以buffer冲洗可能为凝结的残留gel 10/04 08:12
5F：→ williamyang:跑DNA用的我以前是没有用stacking gel(就是上胶) 10/04 08:13
6F：推 williamyang:还有跑的时间好像有点不够,以前我run的size约100多bp 10/04 08:21
7F：→ williamyang:用15cm的12% gel,70V也要run 14 hrs 10/04 08:23
8F：推 runpapa0520:dna acryamide 要用19：1的，另外不用用到20％吧 10/04 11:51
9F：推 damyr:配太高了，而且跑这麽久DNA不会smear掉? 10/04 13:32
10F：推 williamyang:回楼上,不会smear,不过会怕过热,跑出的band就微笑了.. 10/04 13:57
11F：推 bigbean:molecular cloning上面有要分多少bp要用多少%gel的对照表. 10/04 21:37
12F：→ bigbean:至於跑的位子..我是看dna loading dye跑的位子决定.. 10/04 21:37
13F：→ bigbean:一开始先试着跑marker, 等确定条件後再跑sample吧 10/04 21:38
14F：推 dankai:1.在跑之前用running buffer把well冲一下~ 2.你的染色会不 10/04 22:30
15F：→ dankai:会已经出问题..因为你的marker看不见! 3.我们是配上下的~当 10/04 22:32
16F：→ dankai:初是跑AFLP的产物..如果是single band我认为配agarose的就 10/04 22:35
17F：→ dankai:可以了耶~我配4%的!!试试吧~ 10/04 22:36
18F：推 dankai:你的sample跑之前有跟loading buffer预煮过吗!? 10/04 22:43