作者Blibra1002 (man)
看板Biotech
標題[求救] 有人會做primary culture嗎?? 請各位幫幫忙 我快瘋了>"<
時間Thu Oct 2 00:48:03 2008
最近老師給我新的題目要用primary chondrocyte culture當材料
但是將軟骨弄成primary culture這個過程一直有問題
我的實驗方法如下：
1.PBS wash
2.將軟骨切成小片
3.0.2% collagenase作用2-4小時
4.離心1000g 10min
5.+15%FBS 血清培養
目前情況大概是七個病人軟骨檢體
只成功過一次 那次是作用4小時
之後因為做不出來 陸續試了不同的collagenase作用時間 結果還是做不出來
而每次在顯微鏡下 都有看到細胞 但是隔天它們都不會貼
關於檢體的來源 都是開刀房病人的軟骨
有些是醫生冰在-20 過一兩個禮拜才拿給我 叫我直接冰-80要做再拿出來
有些是醫生當天開刀完拿給我 也是冰-80要做在拿出來
不知道是否是檢體的保存或是處理上出現問題
而我已經快被老師照三餐罵了 所以希望有強者幫我解惑
這樣我會非常感謝的....
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 118.232.19.111
1F：推 loham:不要冰，馬上做如何？ 我也不知道，只是提議而已 10/02 01:33
2F：→ Blibra1002:感謝你，我會嘗試看看是否有影響 雖然學姐告訴我冰-80 10/02 01:44
3F：→ Blibra1002:是ok的 但是我一直做不出來 目前只能一試再試 還希望 10/02 01:45
4F：→ Blibra1002:有人可以指點指點 謝謝 10/02 01:45
5F：推 humwang:當然不能冰,一冰細胞就都掛了 10/02 06:40
6F：推 leftt:我們都是從開刀房拿出來立刻作 primary culture 已經不容易 10/02 10:22
7F：→ leftt:不要再增加解凍的這一項變因了. 還有冰-20度 簡直是不可能 10/02 10:23
8F：推 leftt:慢速冷凍會讓細胞內有冰晶產生,細胞就死掉了 10/02 10:26
9F：推 tsubasawolfy:不要冰... 10/02 11:11
10F：推 jbking:哪有人primary culture在冰的 現拿現做阿 那怕是半夜 10/03 08:44
11F：推 sisyphus:現在醫生真辛苦 開完刀的組織還要作防凍 10/03 09:41
12F：推 kibwang:primary culture 整個放到有抗生素的medium 4度C 10/03 11:41
13F：→ kibwang:我最長放過8hr 因為整棟停電後回電過猛 hood掛掉 =.=" 10/03 11:44