作者Blibra1002 (man)
看板Biotech
标题[求救] 有人会做primary culture吗?? 请各位帮帮忙 我快疯了>"<
时间Thu Oct 2 00:48:03 2008
最近老师给我新的题目要用primary chondrocyte culture当材料
但是将软骨弄成primary culture这个过程一直有问题
我的实验方法如下：
1.PBS wash
2.将软骨切成小片
3.0.2% collagenase作用2-4小时
4.离心1000g 10min
5.+15%FBS 血清培养
目前情况大概是七个病人软骨检体
只成功过一次 那次是作用4小时
之後因为做不出来 陆续试了不同的collagenase作用时间 结果还是做不出来
而每次在显微镜下 都有看到细胞 但是隔天它们都不会贴
关於检体的来源 都是开刀房病人的软骨
有些是医生冰在-20 过一两个礼拜才拿给我 叫我直接冰-80要做再拿出来
有些是医生当天开刀完拿给我 也是冰-80要做在拿出来
不知道是否是检体的保存或是处理上出现问题
而我已经快被老师照三餐骂了 所以希望有强者帮我解惑
这样我会非常感谢的....
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.232.19.111
1F：推 loham:不要冰，马上做如何？ 我也不知道，只是提议而已 10/02 01:33
2F：→ Blibra1002:感谢你，我会尝试看看是否有影响 虽然学姐告诉我冰-80 10/02 01:44
3F：→ Blibra1002:是ok的 但是我一直做不出来 目前只能一试再试 还希望 10/02 01:45
4F：→ Blibra1002:有人可以指点指点 谢谢 10/02 01:45
5F：推 humwang:当然不能冰,一冰细胞就都挂了 10/02 06:40
6F：推 leftt:我们都是从开刀房拿出来立刻作 primary culture 已经不容易 10/02 10:22
7F：→ leftt:不要再增加解冻的这一项变因了. 还有冰-20度 简直是不可能 10/02 10:23
8F：推 leftt:慢速冷冻会让细胞内有冰晶产生,细胞就死掉了 10/02 10:26
9F：推 tsubasawolfy:不要冰... 10/02 11:11
10F：推 jbking:哪有人primary culture在冰的 现拿现做阿 那怕是半夜 10/03 08:44
11F：推 sisyphus:现在医生真辛苦 开完刀的组织还要作防冻 10/03 09:41
12F：推 kibwang:primary culture 整个放到有抗生素的medium 4度C 10/03 11:41
13F：→ kibwang:我最长放过8hr 因为整栋停电後回电过猛 hood挂掉 =.=" 10/03 11:44