作者Cheinder (w23w)
看板Biotech
標題[求救] RT-PCR 問題
時間Mon Sep 29 23:11:41 2008
各位先進大家好:
我在做RT-PCR部分一直都做不出來, RNA 品質也都有1.8左右在做RT
時有把轉出的cDNA拿去測260nm 吸光值約1.4左右(一百倍)進一步做
PCR時測吸光值也有0.33(稀釋一百倍) 但是跑膠時marker可以看到
但是要看的基因像是beta-actin,COX-2都沒有band 但是吸光值都有
明顯的高於空白組的0.1, 但是就是照膠時看不到任何band...但是
之前做就有 條件也沒有改變過,用的核酸染劑與Loadinf buffer都
可以清楚的看到marker的band,本來也懷疑是蛋白質污染造成的偽
陽性吸光值,但是測260/280的比值也都有1.9,RT與PCR套組也是用
新的,請問板上的各位高手,一直很納悶為什麼吸光值有,但是跑膠
就看不到,但是marker 確有清楚的band呢!? 謝謝大家!!
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昂首千丘遠 嘯傲風間
堪尋敵手共論劍
高處不勝寒
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◆ From: 140.121.155.59
1F：推 yaliu:為什麼cDNA跟PCR產物要測吸光值阿？？是要測濃度嗎？ 09/29 23:20
2F：推 yaliu:actin都P不出來，可能某個環節有出了錯吧，可以重作一次看看 09/29 23:24
3F：→ yaliu:或者找實驗室其他同學測試一下 09/29 23:24
4F：推 sisyphus:rt之後測吸光值是沒有意義的 你一開始的rna有沒有跑膠 09/30 01:13
5F：→ Cheinder:測吸光值是想比較P出來DNA的濃度 一開始RNA沒有跑膠 09/30 11:30
6F：→ Cheinder:但是有測260/280 確認抽出 謝謝你們的回答!!! 09/30 11:30
7F：推 ookubo:P完後直接去測嗎？ 這樣裡面的拉哩拉紮的會影響吸光值吧? 09/30 12:57
8F：→ ookubo:要是連actin都沒有，PCR沒問題，那可能RNA有問題吧? 09/30 12:59
9F：推 dankai:你還是先把RNA先拿去跑電泳看看~說不定問題就在RNA上!! 09/30 13:38
10F：推 davideason:電泳槽換新buffer,拿RNA跑DNA膠 09/30 14:48